首先,将冻存的 CSF-CTC 的解冻培养物在 257 G 下在 4 摄氏度下旋转 5 分钟。用移液管吸出上清液。加入 1 毫升 PBS 洗涤细胞沉淀。
再次吸出上清液。接下来,将细胞重悬于 96 孔板的三个独立孔中的 450 μL HMC 条件培养基中。将 150 μL 细胞悬液移液到 96 孔板的三个不同孔中。
每三天用新鲜介质填充一次 HMC 调节的介质。当细胞培养物达到 90% 汇合时,将孔的胰蛋白酶消化细胞转移到 24 孔板中的空孔中。在肿瘤细胞的持续培养过程中,选择呈指数级转化和扩增的细胞克隆,以进行进一步的实验。