小鼠脊髓腰椎区域的分离和切片，以生成用于再生治疗测试的器官型切片

首先，在含有冷解剖培养基的培养皿中获得幼犬脊柱的腰部区域。使用解剖立体显微镜和显微剪刀，沿矢状轴切开脊柱。用直镊子轻轻地从脊柱腔中取出脊髓，然后小心地从脊髓的孤立腰部区域（SC）剥离脑膜。将分离的 SC 腰椎区域在冷和新鲜的解剖培养基中转移和孵育 10 至 15 分钟。

使用塑料巴斯德移液管，将组织垂直于刀片放在斩波器仪器的切割台上。去除残留的解剖介质后，继续进行 SC 的自动切片。使用巴斯德移液管，转移切片并与新鲜解剖培养基在 35 毫米培养皿中孵育 15 分钟。用器官型培养基（OM）清洗培养膜插入物的表面三次，并在膜插入物的底部留下一毫升培养基。

在解剖立体显微镜下检查切片，并在调节的膜插入物上播种所需数量的切片。调整切片的方向并去除多余的培养基后，将它们在 37 摄氏度下孵育 30 分钟。然后，将插入物转移到新的培养皿中，并在膜插入物的底部加入一毫升补充有 GDNF 的新鲜 OM。

将切片在 37 摄氏度下孵育。在离体第一天，用新鲜的OM替换旧培养基。在第三天，切换到补充有 GDNF 的移植培养基，并每天向培养基中加入新鲜的 GDNF，直到离体第七天。对于其余的长期培养，仅在更换培养基时添加 GDNF。

对长期培养的小鼠 SC 器官型切片进行免疫荧光测定，发现细胞骨架标记物神经丝和核神经元标志物 RBFOX3 分布广泛，证明了它们的健康状况和神经元身份。