为了将从基于 CRISPR 的模块化组装中获得的 UAS cDNA/ORF 质粒产物转化为大肠杆菌,请在 4 摄氏度下预冷 10 微升尖端。此外,将 1.5 毫升管放入铝冷却块中,在冰上预冷。在冰上解冻感受态大肠杆菌细胞五分钟后,将 10 微升细胞的等分试样加入每个预冷的 1.5 毫升管中。
然后向含有 10 微升感受态细胞的每管中加入 1 微升 UAS cDNA/ORF 质粒产物。轻轻旋转试管混合,然后将其放在冰上 30 分钟。将试管在 42 摄氏度的水浴中孵育一分钟。
然后立即在冰上冷却两分钟。在室温下向每个试管中加入 100 微升预热至 37 摄氏度的 SOC 培养基,并在 250 RPM 和 37 摄氏度的振荡培养箱中孵育试管一小时。接下来,将含有与 UAS 模块的抗生素耐药基因相对应的抗生素的 LB 板加热至 37 摄氏度。
将细胞铺在温暖的板上,并在 37 摄氏度下孵育过夜。