使用从食管活检中分离的细胞进行患者来源的食管类器官培养

首先，采集浸入角质形成细胞无血清培养基 （KSFM） 中的食管活检样本。用 1 毫升分散酶 I 替换 KSFM，并在室温下孵育活检 10 分钟。之后，使用 1， 000 微升移液管，在不接触活检或细胞碎片颗粒的情况下吸出分散酶。

然后，用DPBS冲洗活检。离心活检后，使用1,000微升移液管吸出上清液。接下来，向活检中加入 500 微升胰蛋白酶-EDTA，并在 37 摄氏度下孵育 10 分钟，同时以 800 rpm 的速度振荡。

然后，进行重复移液，直到获得单细胞悬浮液。使用结核菌素注射器的橡胶柱塞头，通过70微米的细胞过滤器过滤细胞。然后，用 2 到 4 毫升大豆胰蛋白酶抑制剂清洗过滤器。

接下来，通过一个 35 微米的细胞过滤器过滤细胞，该过滤器在 5 毫升圆底聚苯乙烯管上带有卡扣盖。离心细胞悬浮液后，使用 1， 000 微升移液管吸出上清液。将细胞沉淀重悬于基底膜提取物水凝胶基质中，并在预热的悬浮细胞培养板中形成 40 微升液滴。

然后，将无培养基的板在 37 摄氏度下孵育 20 至 30 分钟，以确保基底膜提取物液滴凝固。加入预热的 KSFM，补充有 10 微摩尔的 Y27632。在第九天，在类器官中心不断增长的角质化核心中观察到洋葱状多层结构。