使用双光子显微镜对新生小鼠的单细胞水平活性进行成像

首先，将带有钛板的两轴测角仪固定在载物台板上，以便在显微镜下进行 XY 定位。激活扫描软件，使用 20 倍物镜将像素设置为 512 x 512 双向。进行颅窗手术后，将表达 GCaMP 的幼犬放在加热垫上半球的一侧。

使用螺钉将头戴式钛棒固定到钛板上。然后用测角仪水平调整窗口角度。用背光照亮大脑表面，并使用 5 倍物镜的 XY 定位选择成像区域。

在 20 倍水浸镜片下，将滴眼液滴至颅窗。关闭背光后，以单光子模式扫描大脑表面。增加激光强度以可视化来自玻璃和大脑表面的绿色自发荧光。

盖上显微镜以防止外部光线干扰。启动扫描软件到双光子模式进行成像。然后校准激光功率和检测器增益，以最佳方式显示 GCaMP 信号。

在填充了许多 GCaMP 表达神经元的成像区域中找到深度，并开始延时成像以捕获 GCaMP 信号。双光子显微镜显示出生后第 6 天幼仔桶状皮层中的第 4 层神经元活动具有绿色荧光。绿色 GCaMP 更突出，导致信号泄漏到红色通道中并识别出 14 个感兴趣区域。