原代海马神经元解离和电镀用于测量病理蛋白对轴突运输的影响

首先从胚胎小鼠大脑中解剖海马体，然后将解剖的组织置于冰冷的无钙和无镁缓冲液或 CMF 中。接下来，取出 CMF 并用新鲜的冷 CMF 冲洗组织四次，在两次冲洗之间轻轻旋转试管。然后加入过滤后的 0.125% 胰蛋白酶溶液，在 37 摄氏度下孵育 15 分钟，每 5 分钟旋转一次。

孵育后，去除胰蛋白酶溶液，用冰冷的 CMF 洗涤两次。然后加入 3 毫升胰蛋白酶灭活溶液。接下来，要解离细胞，用连接到 3 毫升注射器的 14 号针头抽吸两次，滴定 30 次。

使用 15 号针头继续滴定 2 秒，抽取 30 次，然后使用 16 号针头滴定 20 次，然后用 18 号针头滴定 20 次。然后使用 21 号针头进行 3 秒抽取 15 次，以完成细胞解离。通过将细胞悬液液滴放在显微镜载玻片上来检查细胞团块。

接下来，使用 0.22 微米针式过滤器过滤 5 毫升 FBS。将细胞悬液轻轻地分层到 15 mL 锥形管中的 FBS 上。将细胞在 4 摄氏度下以 200 x g 离心 5 分钟。

去除 FBS 并将沉淀重悬于一毫升温热的无抗生素 neurobasal 培养基中。用 0.4% 台盼蓝稀释细胞悬液并获得细胞计数。将细胞接种在预热的聚-D-赖氨酸包被的 4 孔室载玻片中的 750 微升不含抗生素的 neurobasal 培养基中。

将细胞在 37 摄氏度和 5% CO2 的湿度控制室中孵育。