首先，填充 FPLC 色谱柱并准备样品定量环以进行样品加载。现在去软件。双击泵设置，然后选择 Manual Load Loop。
现在将管路从色谱柱端口连接到流量适配器顶部的管路。从回路 E 拧下管路，然后将其放入废液容器中。然后使用 30 毫升注射器吸取样品并将注射器连接到进样口适配器。
将注射器拧入进样口并注入样品，确保其明显注入样品定量环。现在用色谱柱盖塞住进样口。将样品定量环底部的管路连接到定量环 E 端口。
然后将泵 B 的管路放入洗脱缓冲液中。导航到 主页 选项卡，然后选择 新建方法。之后，选择 方法设置 左列上的选项卡。
转到 Column Type 下拉菜单，然后选择 Custom。输入色谱柱体积为 5 mL，运行所需的流速为 1 mL/min。导航到单位选择，然后选择 CV ， column volumes（CV 色谱柱体积）作为方法基本单位。
验证液相 A 是否设置为缓冲液 A1，液相 B 是否设置为缓冲液 B1。然后选择左侧菜单上的 Method Outline（方法大纲）选项卡。在 Equilibration（平衡）下，将平衡体积设置为 10 CV。在 Sample Application（样品应用程序）选项卡下，通过观察样品定量环来设置样品体积。导航至“色谱柱清洗”，将洗涤体积设置为 5 CV。对于洗脱，将梯度体积设置为 14 CV，从 0% 缓冲液 B 开始到 100% 缓冲液 B。保存方法并开始运行。
确保馏分收集器从第一个馏分的位置开始。输入运行名称，然后单击 Start。在样品应用过程中，将当前进入废液容器的试管切换到干净的烧杯中。
收集流经时从这些管中流出的未结合蛋白质，并将其标记为 FT。运行完成后，导航到 Home （主页） 选项卡，然后选择 Open Run （打开运行）。打开运行以查看色谱图。在顶部菜单中选择 Peak Integration 以标记获得的峰。
选择 Fractions 选项卡以可视化包含洗脱蛋白质的组分。
