首先，从液氮中检索两个冻存管，其中含有第 3 代的冷冻人脂肪来源的间充质干细胞。在 37 摄氏度的水浴中搅拌它们，直到完全解冻。然后使用 75% 酒精对试管进行消毒。
将消毒过的试管放在超干净的桌子上。使用移液管吸出细胞悬液并将其转移到 15 mL离心管中。在低速离心机中以 250 G 和 4 摄氏度离心试管 5 分钟。
同时，准备四个 10 厘米的培养皿，并向每个培养皿中加入 9 毫升培养基。在每道菜上标记名称、细胞类型、世代和实验日期。然后在 37 摄氏度的恒温细胞培养箱中预热它们。
5 分钟离心结束后，先对离心管进行消毒，然后再将其移至超净工作台上。使用移液管去除上清液并加入 4 毫升培养基以达到所需的细胞浓度。轻轻搅拌溶液，直到其均匀分散。
接下来，向每个预热的培养皿中加入 1 毫升细胞悬液，并在水平表面上以交叉模式搅拌，使其摇晃。在将培养皿放入 37 摄氏度的培养箱中之前，在光学显微镜下以 40 倍放大倍率观察细胞。第二天，在进行交换培养基制备之前，在光学显微镜下以 40 倍放大倍率观察细胞状态。
消毒后，将培养皿转移到生物安全 2 级的超净工作台上。从每个培养皿中取出培养基。用 2 毫升 PBS 溶液轻轻冲洗培养皿两次，并向每个培养皿中加入 10 毫升培养基。
将细胞转移到培养箱中，直到它们准备好进行上清液收集。
