用于 TEM 样品制备的固定视网膜类器官的染色、脱水和浸润

要开始对固定的视网膜类器官或 RO 进行染色以进行透射电子显微镜检查，请使用移液器去除在固定后过程中先前添加到微量离心管中类器官中的锇酸。然后，用 pH 值为 7.4 的 0.01 摩尔 PBS 洗涤 RO 3 次，每次 10 分钟，然后用去离子水洗涤 3 次，每次 10 分钟。去除最后的去离子水洗涤液，用约 150 微升乙酸铀代替，并在室温下染色一到两个小时。

接下来，在通风橱中，取出乙酸铀，用 1 毫升 50% 丙酮代替，使样品脱水 10 分钟。然后，使用 70%80%90% 和两次 100% 丙酮依次进行梯度脱水，每次 10 分钟。梯度脱水后，弃去残留的丙酮，加入大约 150 微升丙酮和 Epon-812 树脂的混合物。

将试管放入 37 摄氏度的烤箱中 1 小时。去除之前的丙酮-树脂混合物后，用不同成分的丙酮和 Epon-812 树脂混合物代替。这一次，将试管在 37 摄氏度下孵育过夜。

最后，小心地将视网膜类器官转移到含有约 500 微升纯环氧树脂的新管中。并在 45 摄氏度下孵育 1 小时，然后再进行类器官包埋。