首先,将 70 微米的过滤器放在 5 毫升聚丙烯管上。吸取 500 微升神经细胞培养基。通过过滤器将解离的小鼠海马组织匀浆转移到试管中。
然后将 1 毫升冷神经细胞培养基移液到匀浆器上两次以冲洗。现在,向颗粒中加入 500 微升冰冷的 DPBS 以重新悬浮。用 DPBS 将悬浮液的体积补足至 1.5 毫升。
将 500 微升等渗 percoll 溶液移液到样品中。在离心机中用 2 毫升冷 DPBS 覆盖溶液。然后在中间阶段吸出顶层和髓鞘盘。
接下来,向试管中加入 4 毫升冷 DPBS,离心后吸出上清液。然后将细胞重悬于 100 μL 可固定活力染色溶液中。吸取 1 mL 冷 DPBS 到样品中,然后以 300 x g 离心样品 5 分钟。
吸出上清液后,加入 100 μL CD16、CD32 染色液。将样品涡旋 5 秒钟,然后孵育。孵育后,向样品中加入 1 毫升 FACS 缓冲液并离心。
将 100 微升染色预混液移液到试管中。然后将样品在 4 摄氏度下避光孵育 30 分钟。现在,在像以前一样离心之前,向样品中加入 1 毫升 FACS 缓冲液。
弃去上清液后,将沉淀重悬于 250 μL 固定缓冲液中。接下来,向试管中加入 2 mL 透化缓冲液并再次离心。吸取 100 μL vGLUT1 染色溶液到沉淀中。
然后将混合物涡旋约 5 秒,然后孵育和离心。将细胞沉淀重悬于 250 微升 FACS 缓冲液中。最后,通过 40 微米过滤器过滤样品。
与同种型对照相比,从海马小胶质细胞观察到更高的 vGLUT1-PE 荧光信号。与海马体相比,在小胶质细胞中发现来自嗅球的较高 vGLUT1-PE 荧光信号,而在小脑中发现较低的信号。在脾脏巨噬细胞中检测到最低的信号强度。