首先，将含有解离的小鼠海马组织的试管在 37 摄氏度的水浴中孵育 20 分钟。将混浊的细胞悬液转移到新的 15 mL 离心管中。弃去上清液后，将细胞沉淀重悬于 5 mL 洗涤混合物溶液中。
接下来，将样品通过 70 微米过滤器进入 5 mL 微量离心管中，然后再次离心。将样品进行 Percoll 梯度离心，然后将细胞沉淀重悬于 100 μL MACS 染色缓冲液中，并孵育。现在，在离心前将 1 毫升 MACS 缓冲液移液到样品中。
然后，将细胞沉淀悬浮在 500 μL MACS 缓冲液中。接下来，用 3 毫升 MACS 缓冲液冲洗磁性分离器的阳性选择柱。将 500 μL 细胞悬液轻轻地涂在柱上。
用 MACS 缓冲液洗涤色谱柱 3 次后，将色谱柱放在 15 mL 锥形管上。在色谱柱上加入 5 ml MACS 缓冲液。接下来，将样品以 300 g 离心 10 分钟，然后在沉淀中加入 1 毫升预热的 DMEM。
将 500 μL 最终细胞悬液转移到 24 孔板的孔中。用新鲜预热的 DMEM 替换每个孔的 250 微升。然后，在培养基上添加 3 μg pHrodo Red 标记的突触体。
将相同体积的未标记突触体添加到阴性对照中。孵育后，用冷 DPBS 清洗孔。现在，将 200 微升胰蛋白酶-EDTA 移液到每个孔中。
孵育 35 秒后，将 1 毫升含有 FBS 的 DPBS 移液到每个孔中。通过过滤器将细胞悬液转移到 5 毫升聚丙烯管中，然后用 500 微升冰冷的 DPBS 洗涤每个孔两次。将收集的样品以 500 g 离心 5 分钟。
然后，将细胞在 100 μL 染色溶液中在冰上孵育 10 分钟。接下来，将 CD11b 和 CD45 添加到染色溶液中，使最终浓度为 1 至 100。将样品在 4 摄氏度下避光孵育 20 分钟。
将 1 ml FACS 缓冲液移液到样品中，然后在流式细胞术分析前以 300 g 进行最终离心 10 分钟。在 CD11b 阳性和 CD45 阳性小胶质细胞中观察到与在 pH 值为 4 时从突触体获得的阳性 PE 荧光相当。
