Notexin 损伤后小鼠骨骼肌解剖和单细胞分析的细胞解离程序

对小鼠实施安乐死后，解剖双后肢的 TA 和 GA 肌肉，并将它们放入培养皿的盖子中。用剪刀将组织剪成碎浆。将切碎的组织转移到含有 5 毫升冰冷解离缓冲液的 50 毫升试管中，并保持在冰上。

样品管在 37 摄氏度下加热后，在培养箱中旋转孵育 45 分钟。向样品管中加入 10 毫升洗涤培养基并涡旋。离心试管，吸出内容物至 4 毫升。

接下来，向细胞中加入胶原酶和分散酶各 0.5 毫升。然后，涡旋并孵育它们。孵育后，离心消化的样品，并用 5 毫升移液器重悬沉淀。

接下来，用 5 mL 洗涤介质预润湿放置在 50 mL 试管上的 40 μm 细胞过滤器。使用带有 20 号针头的 5 毫升注射器，吸出并弹出细胞悬液 10 次。然后，通过预先润湿的 40 微米细胞过滤器过滤细胞悬液。

用 10 毫升洗涤培养基收集和过滤剩余细胞后，通过离心沉淀细胞悬液，从试管中吸出上清液，然后轻轻弹动沉淀以使其松动。