股骨内注射脐带血 CD34 ⁺ 细胞到小鼠体内以增强植入

首先，从冰箱中取出含有脐带血 CD34 + 细胞的冷冻管。在水浴中解冻细胞，然后将它们转移到 50 mL 试管中。在滴加摇动试管的同时，向试管中加入 10 倍细胞体积的预热 IMDM，其中含有 50% FBS 和 0.1 毫克/毫升 DNase。

将细胞悬液以 500 G 离心 5 分钟。将沉淀重悬于 20 至 40 微升含有青霉素和链霉素的 PBS 中。将细胞储存在冰上直至使用。

准备一个带有 27 号半英寸针头的 3 毫升注射器。准备一个 0.5 毫升的胰岛素注射器，里面有一根 29 号 12.7 毫米的针头，里面有脐带血 CD34 + 细胞悬液。接下来，准备一个 1 毫升胰岛素注射器，里面有一根 29 号 0.5 英寸针头，里面有 100 微升丁丙诺啡。

将麻醉的小鼠转移到鼻锥上并进行脚趾捏合以确认其准备好注射。将鼠标放在它的背上并弯曲它的后腿。要固定后腿，请将非惯用手的拇指放在脚上，将中指放在臀部，将食指放在股骨外侧。

轻轻拔下膝盖骨周围的头发，然后用酒精棉签擦拭该区域。现在使用带有 27 号半英寸针头的 3 毫升注射器，在皮肤上轻轻地向股骨钻孔。针头插入骨头后，顺时针旋转它，直到整根针头都进入骨头。

逆时针旋转取出针头，直到抽出一半。用酒精棉签擦拭针头周围，然后继续逆时针转动针头以完全去除。接下来，将含有细胞悬液的 0.5 毫升胰岛素注射器插入股骨干。

一旦针头进入骨头，松开对腿部的握把，轻轻地将 25 微升悬液注入股骨。最后，皮下注射丁丙诺啡，将小鼠放回其家笼中，使其从麻醉中恢复。