首先,用画笔将脱氯的果蝇胚胎转移到一条长条的葡萄琼脂上。使用解剖针沿条带边缘排列约 60 个胚胎,它们的后部朝外。现在沿盖玻片的边缘纵向放置一条 18 毫米长的双面胶带。
去除背衬后,轻轻地将盖玻片压在对齐的胚胎上,将带有胚胎的盖玻片转移到装有干燥剂的盒子中。在它们上面添加 halo carbon 油。要显微注射胚胎,首先使用伸出的移液管将 2 微升 DNA 加载到针头中。
将带有卤烃油的对齐胚胎置于倒置显微镜下。接下来,使用显微操作器将针头插入胚胎的后端。使用脚控器,小心地将 DNA 注入胚胎中。
完成第一个胚胎的显微注射后取出针头,然后将其移至下一个胚胎的后端。将注射的胚胎转移到琼脂平板中进行孵化。当鸡蛋孵化后,准备一个小瓶食物。
向小瓶中加入几滴蒸馏水。用立体显微镜和画笔收集孵化的幼虫,然后将它们转移到小瓶中。将样品瓶在 25 摄氏度、50% 至 60% 湿度下孵育 10 天。
过度干燥的胚胎看起来变形,不能用于显微注射。未干燥的胚胎在穿刺时会泄漏大量细胞质,从而降低存活率。适当干燥的胚胎在注射时仅泄漏少量(如果有)。
表达用于胚胎显微注射的 phiC31 整合酶的果蝇系具有白色眼睛。这种基因型的老年果蝇眼睛呈粉红色,这是由于在眼睛中特异性表达的红色荧光蛋白积累所致。成功生产了在 attP2 对接位点带有橙色眼睛的转基因果蝇。