使用实时成像对患者来源的肿瘤类器官进行照射和处理以进行放射敏感性评估

首先，获取患者来源的肿瘤类器官或 PDTO，并每 3 到 4 天向 PDTO 中加入 3 毫升新鲜的富集 DMEM F/12 培养基。使用小动物研究辐射平台照射器，在开放场模式下照射包含 PDTO 的圆顶。照射后，立即用 2 毫升富含 DMEM F/12 的培养基洗涤每个含有 Nagrigel 圆顶的 PDTO。

然后使用 P 1000 将 PDTO 重悬于 1 至 3 mL 市售重组酶中。将细胞悬液转移到 50 mL 离心管中，并在 37 °C 下孵育 5 分钟。离心管以沉淀细胞并吸出上清液，在管中留下大约 1 毫升的重组酶。

然后用富集的 DMEM F/12 培养基洗涤细胞，并在 40 微米网状过滤器中过滤细胞悬液以消除细胞簇，用 PBS 中的 10% tripin blue 对过滤后的细胞的小样品进行染色，并在自动细胞计数器中计数。重悬细胞，在 50 微升含 66% magrigel 的富集培养基中达到 800 个细胞的密度。下一个板，每个圆顶在成像兼容的 48 孔培养板的单独孔中，并孵育板以让 magrigel 固化。

最后，向每个孔中加入 0.5 至 1 mL 富集的 DMEM F/12 培养基，用于实时成像。