为了观察 GFP 的亚细胞定位，在 Nicotiana benthamiana 农林浸润 48 小时后，选择一个平叶并使用打孔器打一个 6 毫米的孔。将 30% 蔗糖溶液滴在载玻片上。将叶子样品背面朝上放置，并用盖玻片盖住。
在农作物渗透后 3 天收集表达重组 GFP 的完整、新鲜的 N.benthamiana 叶子，并称量叶子。用预冷、消毒的双蒸水冲洗叶片以去除碎屑。将 20 克 20 克浸入 500 毫升预冷的 100 毫摩尔磷酸盐缓冲液中，放入 1， 000 毫升广口烧杯中。
用 100 目尼龙、细网纱和塑料板覆盖叶子。将烧杯连接到真空泵。施加 0.8 兆帕真空 1 分钟，然后快速恢复到大气压。
从缓冲液中取出叶子，用吸水纸轻轻吸干。将叶子卷起来，用网眼纱线包裹。为了收集质外体洗涤液 （AWF），将卷起的叶子顶朝上放置在 50 毫升离心管中，网纱由管帽固定。
将叶子在 4 摄氏度下以 500 克离心 5 分钟。去除叶子并使用移液管收集 AWF。将 Nickel Sepharose excel 树脂以相对于蛋白质提取物体积的 1：1， 000 的比例添加到试管中。
依次用 10 倍树脂体积的双蒸水和磷酸盐缓冲液洗涤镍树脂 3 次。将蛋白提取物与镍树脂一起孵育 2 小时，使其完全结合。然后，在 4 摄氏度下以 500 g 离心 5 分钟，以去除上清液中未结合的蛋白质。
用 20 倍树脂体积的磷酸盐缓冲液洗涤 3 次。最后一次洗涤后，加入 10 倍树脂体积的 250 毫摩尔咪唑以洗脱 GFP。将混合物在 4 摄氏度下以 500 g 离心 5 分钟，并收集上清液。
Western blot 分析证实了 30 kdalton 重组蛋白 GFPs 在本氏烟草中的瞬时表达。荧光显微镜显示质外体中存在 GFP。真空浸润离心提取的 AWF 蛋白也含有 GFP。
在测试的 8 种提取溶液中，磷酸盐缓冲液提取的 AWF 和 GFP 量最大。比较不同 pH 下的磷酸盐缓冲液显示，在中性至弱碱性条件下，AWF 和 GFP 提取得到改善。此外，100 毫摩尔磷酸盐缓冲液对回收 AWF 和 GFP 表现出最大功效。
使用 100 毫摩尔磷酸盐缓冲液，从质外体中回收每克新鲜叶 495 μg 总 AWF 蛋白。提取的 AWF 含有 10 μg GFP，相当于总可溶性蛋白中约 18% 的 GFP。镍亲和层析后，AWF 提取的 GFP 纯度达到 84.3%，大大高于总可溶性蛋白提取获得的 44.9% 纯度。
