使用细胞旁通透性测定评估类器官衍生的 2D 单层的上皮屏障完整性

首先，从培养箱中取回含有细胞培养插入物的板，这些插入物具有类器官衍生的 2D 单层。从细胞培养插入物的顶端和基底外侧腔室中取出单层培养基进行评估。用 200 和 500 微升预热的 PBS 轻轻洗涤根尖和基底腔两次。

从根尖腔中取出洗涤液，将 200 微升 0.5 毫克/毫升 4 千道尔顿 FITC-葡聚糖示踪剂的 PBS 溶液涂到细胞培养插入物的顶端腔中。将板在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳的加湿培养箱中孵育 20 分钟。然后从孵育的 24 孔板的基底外侧腔室中取样 50 μL，并将其转移到与酶标仪兼容的 96 孔板中。

在采样孔的基底外侧腔室中更换 50 微升新鲜 PBS。使用预先校准的酶标仪，立即测量 495 纳米激发波长和 535 纳米发射波长的荧光强度。