首先，使用预冷的刮刀将 100 毫克植物组织粉末加入分层聚丙烯微量离心管中。然后立即向试管中加入 1 毫升 20% 甲醇。将带盖的试管放在摇床上，在室温下放置 3 小时。
接下来，将试管以 9， 464 G 离心 10 分钟，并将上清液收集到 LC-MS 自动进样器样品瓶中。设置带有电喷雾电离源和反相 HPLC 色谱柱的 LC-MS 仪器。对于 HPLC，使用 0.1% 甲酸水溶液作为溶剂 A，使用 0.1% 甲酸乙腈溶液作为溶剂 B，将柱温箱温度调节至 45 °C，将流速调节至每分钟 0.5 毫升。
用 99% A 和 1% B 平衡色谱柱。设置一个 30 分钟的梯度，使溶剂 B 浓度在 26 分钟内从 1% 增加到 50%，然后在 26.01 分钟时迅速恢复到 1% B，并保持 4 分钟。配置质谱仪的操作参数。
将接口电压设置为 4 千伏，雾化气体流量为每分钟 3 升，加热气体流量为每分钟 10 升。将脱溶剂管线温度调整至 250 摄氏度，将加热块温度调整至 400 摄氏度，将界面温度调整至 300 摄氏度。将干燥气体流量设置为每分钟 10 升，将碰撞诱导解离气体压力设置为 17 千帕。
在电喷雾电离源正离子模式下构建 MS 方法，包括覆盖 100 至 1， 000 道尔顿质量范围的 Q3 和 Q1 扫描，其中 Q1 扫描用作具有自动同位素排除功能的调查事件。在 Q1 扫描中添加一个子离子扫描链接，质量窗口为 50 至 1， 000 道尔顿，碰撞池能量为负 20 伏，事件时间小于 0.2 秒。接下来，调整 MS 方法，添加等于 LC 方法长度的正模式母离子扫描，碰撞池能量为负 20 伏，事件时间为 0.75 秒。
确保在所有情况下，自动同位素排除或去同位素功能均已启用。设置单取代、双取代和三取代的莨菪烷生物碱片段的主电荷值。接下来，在 MS-MS 方法中，添加等于 LC 方法长度的正模式中性损耗扫描，碰撞池能量为负 20 伏，事件时间为 0.75 秒。
确保在所有情况下，自动同位素排除或去同位素功能均已启用。为源自 tiglic acid、乙酰基和苯乳酸酯或热带酸酯的酯设置莨菪烷生物碱上酯的中性丢失目标质量数。下载 LC-MS 方法并为目标样品创建数据文件。
HPLC 色谱柱在 45 摄氏度下平衡后，注入 10 至 20 μL 样品。
