首先，在改良的 Tyrode 缓冲液中制备适当的包被溶液，并在 37 摄氏度下孵育 2 小时，包被 8 孔微玻片。然后用改良的 Tyrode 缓冲液洗涤包被的微载玻片两次。将微玻片在含 5 毫克/毫升 BSA 的改良 Tyrode 缓冲液中孵育至少 30 分钟，以淬灭非特异性粘附。
要制备洗涤后的血小板，将柠檬酸盐抗凝全血以 200 G 离心 20 分钟，以获得富含血小板的血浆。然后将吲哚美辛和 PGE1 添加到富含血小板的血浆中，并以 500 G 离心 10 分钟。将所得血小板沉淀重悬于改良的 Tyrode 的 HEPES 缓冲液中，温度为 37 摄氏度，以达到 4 乘以 10 的密度，即每毫升 7 个血小板的幂。
让分离的血小板在 37 摄氏度下静置 30 分钟。接下来，将 DHE 溶液添加到血小板悬液中，以达到 10 微摩尔的最终浓度，并在 37 摄氏度下孵育 1 分钟。孵育后，从微载玻片中取出封闭溶液并将其放置在显微镜载物台上进行成像。
然后轻轻分配血小板。在倒置共聚焦显微镜上使用 40 倍油浸透镜监测 DHE 向 2-羟乙锭的转化。image 10 分钟，每 10 秒采集一次图像。
为了监测激动剂反应中的超氧阴离子生成，请在分配血小板后 10 分钟添加可溶性激动剂，并收集荧光图像再持续 10 分钟。使用该方案，研究了血小板粘附在胶原蛋白或纤维蛋白原期间以及粘附在凝血酶刺激的 PLL 上的血小板中超氧自由基的产生。
