从全血中分离单核细胞以获得用于脑研究的诱导小胶质细胞样细胞

首先，将 15 mL 密度梯度培养基放入 15 mL离心管中，并在 20 °C 下以 1， 000 G 离心 1 分钟。倒置含有肝素中采集的人血的试管，并使用经过火灭菌的镊子，取下采血管的盖子。将大约 10 至 15 mL 的血液分配到试管中的密度梯度介质中。

将离心机的减速水平设置为 1，并在室温下将装有血液的试管以 1， 000 G 离心 10 分钟。去除血沉棕黄层上方 1 厘米处的血浆顶层。将离心管中剩余的上清液倒入另一个含有 10 ml PBS 的离心管中。

将离心机的减速水平重置为 3，并用 PBS 和上清液离心管。吸出上清液并轻轻敲击试管以松开沉淀。接下来，将 13 毫升分离培养基加入离心管中，并清洗内壁以正确收集细胞。

使用经过火灭菌的镊子，将 100 微米的细胞过滤器放在 15 毫升锥形管上。然后通过细胞过滤器将细胞悬液过滤到 15 mL 锥形管中。将等量的细胞悬液分配到两个 15 mL 锥形管中。

枚举细胞以计算分离缓冲液的适当浓度。在 4 摄氏度下以 250 G 的浓度沉淀细胞 10 分钟。除去上清液后，加入适量的分离缓冲液，移液约 20 次，使沉淀松动。