首先,从全血中获得人类单核细胞。涡旋人 FcR 封闭试剂,并向细胞中加入所需量的试剂。将试管与细胞在 4 摄氏度下孵育 5 分钟。
每 10 个细胞添加 20 微升 CD11b 微珠,达到 7 个总细胞的幂数,并在 4 摄氏度下孵育 20 分钟。用 70% 乙醇对磁力架进行彻底消毒。孵育后,加入 10 mL 分离缓冲液。
混合,并在 4 摄氏度下以 300G 离心管 10 分钟。支架干燥后,将磁柱放在磁力架上。去除上清液后,加入 1 毫升分离缓冲液,并与移液管轻轻混合。
然后将细胞悬液加载到色谱柱上,每次柱储液器为空时,用 3 mL 分离缓冲液洗涤 3 次。将色谱柱放入 15 mL 锥形管中,不要接触磁性部分。加入 5 mL 分离缓冲液后,将柱塞推入试管中,迫使液体通过色谱柱排出。
离心收集在试管中的细胞悬液。吸出上清液并将细胞重悬于分离培养基中。细胞计数后,将 500 μL 细胞悬液分装到 24 孔板的每个孔中,并孵育过夜。
为了诱导小胶质细胞样细胞,用诱导培养基替换前一天接种的分离培养基,并将细胞孵育 14 天。诱导的小胶质细胞样细胞表现出微小的胞体和许多分支侧支。