首先，在工作平台上布置所需的实验材料。将 100 微升无菌 0.4% 明胶溶液加入黑壁 96 孔透明底板的孔中。将板在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育 30 分钟。
在倒置显微镜下，确认 T75 培养瓶中的内皮细胞 80% 至 100% 汇合。通过抽吸从培养瓶中取出 DMEM 完全培养基。要洗涤细胞，请加入 10 毫升 PBS 并轻轻摇动培养瓶。
用 5 毫升细胞解离溶液替换 PBS。将培养瓶在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育约 12 分钟。6 分钟后轻击培养瓶。
帮助促进解离。向培养瓶中加入 5 mL 预热的 DMEM 完全培养基，并混合细胞悬液。使用 10 mL 血清移液管，将细胞悬液转移到无菌 50 mL 试管中，并以 150 G 离心 5 分钟。
同时，使用连接到真空的 pastor 移液器，从 96 孔板中吸出明胶溶液。离心细胞后，从试管中取出 supernatin 而不干扰沉淀。使用血清移液管，向试管中加入 8 毫升新鲜 DMEM 完全培养基，然后轻轻吸取悬浮液以打碎细胞沉淀。
在血细胞计数器上使用 trippen blue 对细胞进行计数。添加 DMEM 完全培养基，使密度为每毫升悬浮液 600， 000 个细胞。通过轻轻倒置试管来混合细胞悬液。
将细胞悬液添加到 50 mL多通道移液器储液槽中。每 30 秒轻轻左右摇动储液槽以混合悬浮液，并使用多通道移液器向涂有明胶的 96 孔板的每个孔中加入 100 微升。装回透明板盖，在无菌罩表面从北到南、从东到西滑动，轻轻摇晃板。
将板在 37 摄氏度下与 5% 二氧化碳一起孵育 16 至 24 小时。
