使用 Peptide：MHC 四聚体对抗原特异性 T 细胞进行染色，用于流式细胞术分析和分选

富集肺部样品中的 T 细胞后，向每个样品中加入 1 毫升 10 毫摩尔达沙替尼。涡旋混合物，并在室温下孵育 5 分钟。添加 PE 或 APC 偶联肽 MHC 四聚体至终浓度为 10 纳摩尔。

涡旋混合物后，在室温下避光孵育 1 小时。当样品用肽 MHC 四聚体染色时，制备抗体预混液以对细胞表面标志物进行染色，四聚体染色孵育期还剩 15 分钟，加入 1 至 100 稀释度的表面抗体预混液。加入 50， 000 个流式细胞计数微珠和冷分选仪缓冲液，达到约 5 mL 的最终体积，然后加入冷分选仪缓冲液至 15 mL，并在 4 摄氏度下以 400 x g 离心试管 5 分钟。

小心吸出上清液，留下大约 100 μL 的上清液和细胞沉淀。现在，用额外的 200 μL 分选缓冲液重悬样品，并将其转移到 5 mL FACS 管中。