使用基于磁珠的阴性选择纯化和分析小鼠幼稚 CD4 ⁺ T 细胞

首先，制备小鼠脾单细胞悬液，其 1 乘以 10 倍/毫升 8 个细胞，体积为 0.1 至 2 毫升。向样品中加入 50 μL 大鼠血清。将样品转移到 5 mL 聚苯乙烯圆底管中。

向样品中加入 50 μL 分离混合物。充分混匀并在室温下孵育 7.5 分钟。现在每毫升添加 50 微升的消耗混合物。

充分混合并孵育 2.5 分钟。同时，涡旋磁珠以确保均匀分散。向样品中加入 75 μL 磁珠。

充分混合并孵育 2.5 分钟。用 RPMI 1640 培养基加满样品，使最终体积为 2.5 mL，并混合数次。然后将试管放入磁力架中 2.5 分钟。

拿起磁铁，用试管连续倒置，将富集的细胞悬液倒入新试管中。使用血细胞计数器确定细胞数量。在分离前后对幼稚 CD 4 阳性 T 细胞进行流式细胞术分析。

设门后，将细胞悬液转移到新的离心管中。以 400G 离心 5 分钟，弃去上清液。将沉淀重悬于 200 至 500 微升补充有 10% FBS 的 RPMI 1640 培养基中。

对于每 1 mL 细胞培养物，加入 2 μL 白细胞活化混合物并混合。将细胞在 37 摄氏度和饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养 4 到 6 小时。