体外将致病性 Th17 细胞诱导到小鼠的初始 CD4⁺ T 细胞中

首先，从预涂的 24 孔板中取出 PBS。在 Th17 细胞培养基中重悬富集的小鼠脾幼稚 CD4+T 细胞，并分配到预涂有抗 CD3 的 24 孔板的不同孔中。将 Th0 细胞培养基、经典非致病性 Th17 培养基和经典致病性 Th17 培养基加入板的其余孔中进行对比。

向每个孔中加入 1 微升抗 CD28 溶液。将细胞在 37 摄氏度的 5% 二氧化碳培养箱中培养 5 天。第 2 天，用新鲜培养基替换一半的细胞培养上清液。

第 5 天在光学显微镜下观察细胞。从每组中收集细胞上清液，并在 80 摄氏度下冷冻保存。初始 CD4+T 细胞与 Th0 培养基和 Th17 分化培养基一起培养 5 天，使 T 细胞在两种培养基中都显示出簇状生长。

流式细胞术分析显示，90% 的幼稚 CD4+T 细胞在新型 Th17 细胞培养基的刺激下成功分化为致病性 Th17 细胞。