GFP 标记的斑马鱼 T-ALL 细胞的体内增殖和收获

首先，在 37 摄氏度的水浴中解冻含有 1 毫升冷冻 GFP 标记的斑马鱼 T-ALL 细胞的小瓶，轻轻摇晃。将小瓶中的内容物缓慢移液到装有 4 毫升冰上鱼培养基的 15 毫升锥形管中。在 4 摄氏度下以 2， 500 G 的浓度离心细胞 5 分钟，弃去上层，然后将沉淀重悬于 0.5 毫升鱼培养基中。

将 10 μL 细胞悬液加入含有 10 μL 台盼蓝染料的微量离心管中。充分混合并将 10 μL 转移到血细胞计数器上，并在显微镜下计数细胞。接下来，握住麻醉的成年 CG1 斑马鱼，腹侧朝上。

使用 Hamilton 微量注射器，将 5 至 6 微升细胞悬液注射到腹膜内间隙。移植后大约 21 至 28 天，评估来自麻醉斑马鱼的 GFP 标记的白血病细胞的百分比。要收获白血病细胞，请将安乐死的斑马鱼移至新的培养皿中，并加入 1 毫升鱼培养基作为细胞的缓冲。

使用剃须刀片，先将斑马鱼斩首，然后浸渍组织。上下移液以去除大块细胞。将细胞悬液通过 40 微米细胞过滤器放入 50 mL 锥形管中，以解离成单个细胞悬液。