用于移植和肿瘤追踪的 CT-FR 染色斑马鱼 T-ALL 细胞的制备和分选

为了制备供体板，将 500， 000 个野生型 CG1 斑马鱼细胞转移到 15 mL 锥形管中。加入 5 毫升鱼培养基，将细胞原液稀释至每微升 100 个细胞。将 50 微升细胞悬液分配到 96 孔板的每个孔中，并将板置于 4 摄氏度直至分选。

为分选实验的设置准备无染色和单色对照。将对照和样品的细胞悬液通过 35 微米过滤帽进入冰上的传真管中。在 4 摄氏度下以 2， 500 G 离心 96 孔板。

小心地从每个孔中取出 45 μL 的上清液，留下 5 μL 的液体。用 20 微升移液器重悬细胞，并使用 Hamilton 微量注射器，将细胞悬液注射到所需数量的 CG1 斑马鱼中。在移植带有分选细胞的 CG1 斑马鱼进行极限稀释分析后，与 CT-FR 低细胞相比，CT-FR 高细胞的白血病干细胞频率高出四倍。

移植后 28 天的斑马鱼代表性图像显示，89% 的 CT-FR 高斑马鱼发展为白血病，而 CT-FR 低组为 20%。CT-FR 高斑马鱼对白血病的潜伏期显着缩短。与 CT-FR 低斑马鱼相比，CT-FR 高斑马鱼的总存活率显着降低。