缺氧敏感 CAR-T 细胞介导的细胞毒性的体外评估

首先，将 1000 个靶细胞接种到两个平底 96 孔组织培养板的每个孔中，该板含有 200 微升 FBSDMEM。第二天，小心地从每个孔的顶部吸出 100 微升上清液。将嵌合抗原受体 T 细胞或未转导的 T 细胞以不同比例添加到 100 μL FBSDMEM 中。

将一个板置于 21% 氧气气氛中，将另一个板置于 1% 氧气气氛下的移动二氧化碳氧气氮培养箱中。共培养 24 小时后，使用移液管小心地将所有上清液转移到新的 U 形底 96 孔板中。将上清液储存在零下 20 摄氏度用于细胞因子检测。

现在将 60 μL 惰性裂解缓冲液添加到黑色平底 96 孔板的每个实验孔中。将板放在摇床上 30 分钟，以确保有效的细胞裂解。向每个实验孔中加入 60 微升萤火虫荧光素酶底物。

立即使用酶标仪测量荧光素酶活性。最后，用给定的方程计算归一化的细胞毒性百分比。靶向 CAR 的缺氧敏感 HER2 能够有效杀死靶细胞，无论大气是低氧还是常氧。

相比之下，HER2-BBz-ODD CAR T 细胞在所有条件下的常氧条件下均表现出显著较弱的细胞毒性。