制备用于流式细胞术分析的单细胞胚胎悬浮液以评估肿瘤异种移植

首先，获得注射有预染有CM-Dil的白血病细胞的斑马鱼胚胎。将麻醉的胚胎转移到1.5毫升离心管中，并使用P200移液管，将蛋黄溶解在100微升无钙林格溶液中5分钟。将每个脱黄胚胎样品与一毫升胰蛋白酶胶原酶溶液在 29 摄氏度下孵育 30 至 35 分钟。

使用 P1000 吸头，每五分钟在该溶液中上下移液胚胎，直到骨架结构不再可见。为了停止反应，向试管中加入 200 微升 FBS。充分混合并再孵育 5 分钟。

将细胞悬浮液以 300 G 在 4 摄氏度下沉淀 5 分钟。丢弃上清液后，在冷冻的 PBS 中洗涤细胞沉淀两次，并通过 70 微米细胞过滤器过滤细胞。洗涤细胞后，将细胞沉淀重悬于含有与移植细胞反应的抗体的染色培养基中。

将细胞在 4 摄氏度下孵育 20 分钟。沉淀细胞并将它们重悬于 200 微升染色培养基中，该染色基含有一个微摩尔螺旋和 P 蓝。将细胞混合物转移到 5 毫升圆底聚碳酸酯管中并进行流式细胞术。

双重标记允许测量良好与劣质推注接种之间肿瘤负荷的差异。