首先,将 100 微升 HUVEC 细胞接种到 96 孔板的孔中。将板置于 37 摄氏度的细胞培养箱中,在 5% 二氧化碳下放置 6 小时,以促进细胞沉降。接下来,用 100 微升含有 2% FBS 的内皮细胞生长基础培养基替换每个孔中的培养基,然后再次孵育。
第二天,将板放置在 96 孔卷绕的制造工具中。按下设备的控制杆以产生划痕。在松开控制杆之前,小心地掀开伤口制作工具的盖子,以防止双重划伤。
用 200 微升补充 FBS 的内皮细胞生长基础培养基洗涤孔两次。确认完全去除碎片后,将 100 微升制备的刺激或对照溶液移液到每个孔中。使用活细胞成像显微镜每小时采集一次图像,持续 24 小时。
阳性对照显示原始划痕区域成功迁移。技术问题被视为斑片状细胞生长、双重划痕或划痕边界上的波浪。相对伤口距离增加 25% 被认为是最佳的。
阳性和阴性对照的分离不正确表明动态范围低。