固定和封闭 2D 人脐静脉内皮细胞 （HUVEC） 培养物用于免疫组织化学分析

首先，将 30 毫升 5% 氢氧化钾的甲醇溶液加入 50 毫升试管中。将 100 个直径为 12 mm 的盖玻片在试管中不断搅拌孵育 30 分钟。接下来，用软化水清洗盖玻片 30 分钟。

洗涤完成后，将盖玻片转移到 70% 异丙基溶液中储存。要涂覆盖玻片，首先将它们单独靠在方形培养皿的壁上。当异丙醇蒸发后，将它们转移到 24 孔板中。

将 PBS 中的一毫升胶原蛋白移液到每个孔中并孵育。接下来，用 1 毫升 PBS 清洗盖玻片约 4 至 5 次，每次 5 分钟。将培养的 HUVEC 移液到带有涂层盖玻片的孔中。

将细胞培养所需时间后，用 1 mL PBS 洗涤细胞 5 分钟。在室温下将细胞固定在 1 毫升 2% 多聚甲醛中 20 分钟。现在，用 1 mL PBS 冲洗细胞 3 至 4 个洗涤周期，每个洗涤周期 5 分钟。

最后，在染色前将 1 毫升封闭缓冲液移液到孔板中。