3D 胶原蛋白基质中人脐静脉内皮细胞 （HUVEC） 球体的免疫细胞化学，用于研究体外血管生成

首先，将发芽的球状体 HUVEC 凝胶固定在 1 毫升 4% 多聚甲醛中 1 小时。用 1 毫升 PBS 轻轻洗涤凝胶约 3 到 4 次。将凝胶从板的每个孔表面完全分离，然后将它们转移到新的 24 孔板中。

向孔板中加入 1 mL 封闭溶液，然后在轨道摇床上室温孵育 1 小时。孵育后，在孵育前将 500 μL 一抗溶液移液到孔中。第二天，用 PBS 轻轻洗涤凝胶 5 个洗涤周期，每个周期 5 分钟。

在封闭缓冲液中加入 500 μL 用鬼笔环肽-FITC 稀释的相应二抗。将板在 4 摄氏度下在轨道振荡器上孵育过夜。在 PBS 中洗涤凝胶后，将它们转移到显微镜载玻片上。

将两滴含 DAPI 的封固剂滴到盖玻片上，并将其放在每个凝胶上。用指甲油密封干燥的凝胶。将它们放在黑暗中，然后在 4 摄氏度下储存，直到进一步分析。