首先,准备并定位麻醉大鼠进行电生理学。应用单相宣泄方波脉冲刺激膈神经以记录 CMAP 反应。逐渐增加刺激强度,直到响应的幅度停止增加。
然后,将刺激强度提高到最大响应所需水平的 120% 左右,以确保超最大刺激并记录额外的响应。测量并记录 CMAP 的峰峰值幅度(以毫伏为单位)。以 0.1 赫兹的频率进行持续时间为 1 毫秒的次极量刺激。
以 0.03 毫安的增量逐渐增加强度以引起增量反应,直到达到最小的全或无响应。然后,以 2 到 10 毫安的刺激强度获取初始响应。保存第一个增量响应后,以 0.03 毫安的增量获取具有逐渐升高刺激强度的额外增量。
确保增量响应的初始负峰与最大 CMAP 响应的负峰在时间上对齐。鉴于隔膜参与呼吸,检查每个增量反应中的稳定性和无分馏,以确认三个重复反应的一致性。实时观察增量响应,并将其叠加在以前的记录上,以便进行视觉区分。
然后,确认增量幅度至少为 25 微伏。记录 10 个增量响应后,验证每个增量的幅度不超过最终响应总幅度的 1/3。要估计 SMUP 的平均振幅,请平均 10 个增量的值。
接下来,将最大 CMAP 幅度除以平均 SMUP 幅度以确定 MUNE。胸膜内 CTB-SAP 注射后 7 天,成年大鼠的 MUNE 减少到 60 个功能性运动单位,而对照大鼠为 74 个。CMAP 振幅保持相对稳定,表明侧支发芽是一种可能的补偿机制。
注射后 28 天内测量隔膜 CMAP 、 SMUP 和 MUNE。CMAP 显示没有显着变化。CTB-SAP 大鼠 SMUP 的平均增加约为 50% 至 60%,随着时间的推移变化显着,并归因于 CTB-SAP。
CTB-SAP 大鼠的 MUNE 降低了约 40%,表明 CTB-SAP 治疗的时间影响显著。