首先,使用 DNA 提取试剂盒从果蝇样品中提取 DNA。然后使用酶标仪测定 OD260 和 OD280 的值,以比较 DNA 纯度和核酸浓度。接下来,通过将 190 μL 工作溶液添加到两个 0.5 mL离心管中来制备荧光计标准溶液。
然后将标准品 1 和标准品 2 各 10 μL 加入工作溶液中。将试管避光至少 15 分钟。将 2 μL 测试 DNA 与 198 μL 工作溶液混合在 0.5 mL离心管中,并在黑暗中保持混合物至少 15 分钟。
15 分钟后,打开荧光计并选择 dsDNA 浓度测量,长距离设置。测试标准 1 和标准 2 以获得标准曲线。然后将要测试的样品放入检测孔中。
将 DNA 加标体积调整为 2 微升并进行测量。为了观察 DNA,首先设置 20 μL 的 PCR 扩增反应。将试管放入热循环仪中并运行 PCR 循环。
PCR 后,对产物进行 2% 琼脂糖凝胶电泳。然后将凝胶放在凝胶成像系统上进行光分析。通过酶标仪评估提取的 DNA 纯度表明,所有新鲜样品和旧样品 1 的 OD260 与 OD280 比值均高于 2。
相比之下,旧样本 2 的比率较低。OD260 读数得出的 DNA 浓度在新鲜样品中最高,其次是旧样品 1,在旧样品 2 中最低。电泳分析显示,条带在 250 到 400 个碱基对的范围内,与旧样品相比,新鲜样品中的条带更为明显。