首先，在含有无菌 HBSS 的 100 毫米玻璃板中洗涤新鲜的人心房样品。轻轻摇晃板中的样品以去除任何残留的血液。将样品转移到用少量 HBSS 润湿的 100 毫米板中。
用交叉的手术刀将样品切成 2 毫米大小的方块。接下来，将四个小的心肌碎片转移到 35 毫米的板中。将无菌盖玻片放在碎片上，轻轻按压。
将 1.5 毫升 DMEM 移液到板中。然后将培养板在 37 摄氏度下孵育，补充 5% 二氧化碳。当培养物达到 85% 汇合时，从培养箱中取出板，并使用无菌镊子提起盖玻片。
然后将其倒置在新的 35 毫米板上。然后加入无菌 PBS 冲洗。现在去除心肌碎片。
然后从板中吸取 DMEM。使用无菌 PBS 冲洗含有生长细胞的板。丢弃冲洗液后，向每个板中加入 1 毫升 0.25% 胰蛋白酶 EDTA，并在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育板 5 分钟。
孵育后，从培养箱中取出板，并使用显微镜确认细胞脱离。接下来，向每个板中加入 2 毫升胰蛋白酶终止液 （TSS） 以阻止胰蛋白酶消化。将细胞悬液转移到无菌的 15 ml 试管中。
将其在 400 G 下在 4 摄氏度下离心 5 分钟。使用 5 毫升血清移液管吸出上清液。然后向沉淀中加入 3 毫升 DMEM 并重悬。
将细胞悬液放在 60 毫米板上。在 37 摄氏度下孵育细胞，补充 5% 二氧化碳。接下来，将 3 毫升无菌 0.2% 明胶溶液移液到每个 60 毫米板中。
孵育后，吸出溶液并加入 3 毫升无菌 PBS 直至进一步使用。从培养箱中取出含有心脏成纤维细胞的板。从板中取出 DMEM，用无菌 PBS 冲洗。
弃去冲洗液后，向每个板中加入 1 毫升 0.25% 胰蛋白酶 EDTA。使用显微镜确认细胞脱离。接下来，向每个板中加入 2 毫升 TSS 以阻断胰蛋白酶消化。
将细胞悬液转移到无菌的 15 ml 试管中。将其在 400 G 下在 4 摄氏度下离心 5 分钟。使用 5 毫升血清移液管吸出上清液。
然后向沉淀中加入 3 毫升 DMEM 并重悬。从 60 毫米明胶包被板中取出 PBS，并将细胞悬液放入板中。以汇合状态培养成纤维细胞长达 21 天。
培养 21 天后，吸出培养基。然后用 3 毫升 PBS 冲洗板。吸出 PBS 并加入 1 毫升脱细胞溶液后，在倒置对比显微镜下观察板。
两分钟后，轻轻吸取 4 ml PBS 以稀释板中的脱细胞溶液。吸出稀释的溶液。然后用 PBS 轻轻冲洗板。
最后，向板中加入 1 毫升 PBS。将细胞外基质包被的板储存在 4 摄氏度直至进一步使用。在 3 到 5 天内观察到来自培养物中的天然心肌小片段的成纤维细胞生长。
脱细胞导致板表面出现细胞外基质包被。由于脱细胞，体外产生的心脏细胞外基质的组成和结构得以保留。
