首先，在含有 1% 青霉素和链霉素的人 MSC 培养基的六孔板中培养 MSC。然后继续在细胞质膜中用细胞痕量紫标记 ARPE19 Mito-RFP 细胞。为此，将 20 μL 二甲基亚砜加入一小瓶细胞痕量紫试剂中，并在使用前立即充分混合。
将 ARPE19 Mito-RFP 细胞生长至所需的 80% 至 90% 密度为了制备上样溶液，请在预热的 DPBS 中稀释细胞痕量紫储备溶液。然后从细胞中取出培养基，并用 1 毫升的上样溶液替换。将细胞在 37 摄氏度下孵育 10 分钟。
孵育结束时，去除上样溶液。用 DPBS 洗涤细胞两次后，加入 2 毫升新鲜的完全培养基。然后将细胞在 10 摄氏度下孵育至少 37 分钟，让细胞痕量紫进行乙酸盐水解。
接下来，通过向每个孔中加入 50 微升 DPBS 来制备 24 孔板。将盖玻片插入板中，静置 1 分钟。使用负压从孔中取出 DPBS，以确保盖玻片靠近培养皿底部。
一旦细胞密度达到 80% 至 90%，去除原始培养基并用 DPBS 洗涤细胞一次，加入 1 毫升胰蛋白酶 EDTA DPBS 混合物，并在 37 摄氏度下孵育 3 至 4 分钟。然后轻轻敲击六孔板以分离粘附的细胞。加入 1 毫升新鲜的完全培养基以终止消化。
然后，用移液枪轻轻重悬所有细胞，并将所有收集的细胞转移到 15 毫升离心管中。现在将细胞以 200 G 离心 5 分钟。吸出上清液，将细胞重悬于 1 mL 新鲜培养基中。
将 10 微升细胞悬液放在计数板上进行计数。将 MSCs 和 ARPE19 细胞接种到 24 孔板中后，在显微镜下观察细胞。摇动板，直到细胞均匀分布。
将它们在培养物中孵育 24 小时。对于间接共培养，请参阅 24 孔板每孔 500 微升培养基中的 10， 000 个 ARPE19 细胞。将插入物放入已接种细胞的孔中。
每孔将 10， 000 个间充质干细胞接种在上部细胞室的 100 微升培养基中。
