FISH 用于福尔马林固定石蜡包埋癌症标本的基因扩增评估

首先，在老化后获得样品安装玻片。要预处理载玻片，请将其连续浸入含有适当溶液的 coplin 罐中指定时间。用 100 至 200 μL 蛋白酶 K 消化缓冲液消化组织，并在室温下孵育 1 分钟。

要停止消化，请立即将玻片连续浸入乙醇溶液中，每次浸泡 2 分钟。将 FISH 杂交混合物涂在载玻片上，并用盖玻片盖住样品。将玻片放在 75 摄氏度的热板上，例如 Slide Moat 杂交系统，放置 2 到 5 分钟。

然后将玻片转移到另一个设置为 37 摄氏度的热板上，进行过夜杂交。接下来，将玻片浸入温洗涤缓冲液中，并小心地取下盖玻片。在黑暗中使用适当的试剂清洗和染色玻片。

将玻片快速浸入去离子水中不超过一秒钟，然后将其放在纸巾上。干燥后，使用防褪色封固剂封固载玻片。放置盖玻片并在成像前用指甲油密封。

使用 60X 油透镜，在多个 Z 轴序列中捕获荧光信号。最后，执行最大 3D 投影以获得最佳分辨率，并应用反卷积或其他背景清除算法。在三阴性乳腺癌样本中，核 FISH 主要显示每个细胞核有两个不同的点，代表她的两个 ERBB2 信号。

相比之下，HER2 阳性样本显示丰富的 FISH 信号，表明基因扩增模式不同。此外，HER2 阳性样本中的一些细胞核可能表现出簇状，表明额外的染色体 DNA 枢纽，这是增加基因扩增的焦点。