使用手动方法进行全血纯化和外周血单核细胞 （PBMC） 分离

首先，在室温下轻轻倒置 10 毫升全血管 10 次。使用摆动的吊篮转子，在 22 摄氏度下以 800 g 离心试管 10 分钟，同时打开制动器。然后将样品放入生物安全柜中，检查三个不同的层。

用字母 A、B 和 C 标记三个 5 毫升的聚苯乙烯管，涡流并通过抽吸收集 1 毫升血沉棕黄层并转移到标记为 A 的管中，然后将 60 微升 0.1 摩尔 EDTA 添加到含有血沉棕黄层的管 A 中。将 50 微升混合物加入试管中 A.上下移液至少 3 次以混合并在室温下孵育 5 分钟。之后，将 890 微升 PBS 添加到试管 A 中，并通过移液至少混合 3 次。

接下来，涡旋磁珠管 30 秒。将 50 微升磁珠添加到试管 A 中，并移液至少三次以彻底混合磁珠。立即将试管 A 放入磁架中，并在室温下孵育 5 分钟。

然后小心地将富集的细胞悬液移液到试管 B 中，收集不含红细胞或少量红细胞的透明组分，以实现最佳的 PBMC 回收率。之后，从磁铁架上取下管 A 并丢弃。接下来，将 50 微升磁珠添加到管 B 中的细胞悬液中，并上下移液至少三次。

立即将试管 B 放入磁架中，并在室温下孵育 5 分钟。小心地将富集的细胞悬液移液到管 C 中，仅收集透明组分。从磁铁架上取下管 B 并丢弃。

然后立即将试管 C 放入磁架中，在室温下孵育 5 分钟。小心地将富集的细胞悬液移液到标记的离心管中，并用 PBS 加满至 2 mL。将 50 μL 细胞悬液转移到自动细胞计数仪的样品杯中。

加入 450 μL PBS，进行 1 至 10 倍稀释的细胞计数。