首先,在室温下平衡总甘油三酯试剂盒 20 分钟。收集过夜生长的 Hep G2 细胞的上清液,并以 1, 570 G 离心 10 分钟。设置标准品和测试样品孔。
将 50 微升油酸添加到标准标记的孔中。除了空白孔和标准孔外,还向样品孔中加入 10 μL 细胞培养物。然后向每个孔中加入 40 μL 样品稀释剂。
现在向每个孔中加入 100 μL 检测抗体、辣根过氧化物酶。用板膜密封,并在 37 摄氏度的恒温箱中孵育。一小时后,弃去上清液,在无尘纸上吸干。
向每个孔中加入洗涤液,并在室温下孵育 1 分钟。现在,向每个孔中加入 50 微升底物 A 和 50 微升底物 B。轻轻混匀,并在 37 摄氏度下孵育 15 分钟。
加入 50 μL 终止溶液,并在 15 分钟内测量 450 纳米的光密度。沿 x 轴绘制标准品浓度,沿 Y 轴绘制相应的吸光度值。执行线性回归并推导出曲线方程以计算每个样品的浓度值。
与对照组相比,用不同浓度的油酸处理 Hep G2 细胞导致细胞上清液中总甘油三酯含量显着增加。