首先,从小鼠获取骨髓细胞,并将每毫升 5 微克 Hoechst 33342 添加到 2 毫升细胞悬液中。还要准备阴性对照管。在 37 摄氏度的水浴中孵育 90 分钟,每 30 分钟轻轻搅拌一次。孵育后,将细胞在冰上冷却 5 分钟,然后在 4 摄氏度下以 250G 离心 5 分钟。
将细胞重悬于含有 2% FBS 的 Hank 平衡盐溶液的冷运行溶液中。再次在 4 摄氏度下离心 5 分钟。接下来,将所得细胞沉淀重悬于每个样品 500 μL 的电泳溶液中。
在流式细胞术分析之前,每毫升补充 2 微克碘化丙啶的细胞,并将其置于冰上约 5 分钟。