双重功能化线性 DNA 底物与链霉亲和素包被的磁珠的结合

在线性 DNA 底物的两端功能化后继续进行反应。首先，取 4 个 S-400 离心柱，涡旋至少 30 秒，以重悬填料。然后，将它们在 735G 下离心 1 分钟以去除储存缓冲液。

转移色谱柱以清洁 1.5 mL 试管。立即向每根柱中加入 100 μL 双功能化线性 DNA 溶液。将色谱柱以 735G 离心 2 分钟，使 DNA 流过色谱柱，同时保留未掺入的核苷酸。

将含有来自四根色谱柱的 DNA 的流出液汇集在一起后，用移液管测量体积。接下来，涡旋 M-280 链霉亲和素包被的磁珠 30 秒以使其重悬。将 4 毫克重悬的磁珠转移到干净的 1.5 mL 试管中。

将试管放在磁架上 1 分钟以收集磁珠，然后取出储存缓冲液。涡旋 5 秒，然后将微珠重悬于 1 mL 缓冲液 A 中，然后在室温下孵育微珠 5 分钟。将试管放入磁性支架中 1 分钟，收集磁珠。

去除缓冲液 A 后，通过移液将磁珠重悬于 400 μL 2X 缓冲液 A 中。然后，向磁珠中加入 400 μL 功能化 DNA 溶液，并通过移液轻轻混合。将微珠 DNA 混合物在 4 °C 下孵育过夜，并端到端旋转。

第二天，使用磁架去除上清液，然后计算与磁珠结合的 DNA 总量。然后，用缓冲液 B 和缓冲液 C 依次洗涤珠子，将珠子重悬于 300 微升缓冲液 C 中，并制成四个 75 微升的等分试样。