首先,将混合生命阶段松木线虫的悬浮液设置为每毫升 1000 个线虫。在双目显微镜下以高达 40 倍的放大倍率对凹玻片上的线虫进行计数。在接种线虫之前,手动从松树茎上部 5 厘米以下的截面上取下针头,并使用消毒的手术刀做一个浅表纵向切口。
在伤区,放置一块消毒棉,盛放 0.5 毫升松木线虫悬浮液,并用透明条固定以保持湿度。将温室保持在潮湿的环境中并经常浇水。定期跟踪松树萎病的进展,并通过量化变色和枯萎针头的百分比来对症状进行评分。
接种后 20 天,在茎的基部切下幼苗以提取挥发物。将幼苗放入牛皮纸袋中,在零下 20 摄氏度下冷冻。松树幼苗成功感染松树线虫后,在感染后约 20 天出现松树萎病症状。