通过 z 评分卵泡密度分析处理卵巢组织并确定年轻女性的卵巢储备

首先，在活检后从手术室收集卵巢组织，装在含有 5 毫升补充 1X DPBS 的试管中。使用无菌手术刀，从卵巢表面切下一小块约 2 毫米见方的卵巢组织。然后将组织在室温下浸入 350 μL Bouin 溶液中 2 小时。

孵育后，用 70% 乙醇洗涤组织 3 次。包埋和切片组织后，进行苏木精和伊红染色并获取数字图像进行分析。使用适当的软件（如 QuPath）打开文件。

将文件拖到 QuPath 的主窗口上，并将图像类型设置为 Brightfield H&E。使用比例尺定义距表面上皮 1 毫米的距离。单击椭圆工具并注释毛囊。

计算从原始成熟阶段到初级成熟阶段的 1 毫米区域内的卵泡数量。将样本 ID、年龄、每张玻片的毛囊数、切片厚度和 N 截面计数输入到 Follicle Z-Score Calculator Excel 文件中名为 Follicle in millimeter cube 的工作表中。在每个计数部分确定最大的 10% 卵泡后，单击线条工具并绘制两条垂直穿过卵母细胞膜的线。

选择 Measure，然后单击 Show annotation measurements 以确定这些卵母细胞的平均直径。在标有 length 的列下记录测量值（以微米为单位）。在 Follicle Z-Score Calculator Excel 文件中输入每张载玻片的最大 10% 卵泡的平均卵母细胞直径（以微米为单位）。

将图像放在 QuPath 中的屏幕中央，然后单击 ImageJ 图标。然后选择 Send snapshot to ImageJ.在 ImageJ 中，使用画笔工具从边界划定一毫米，然后单击 Image，然后单击 Type，然后选择 8 位。

接下来，单击线条工具并在比例尺上画一条线。选择 Analyze，然后选择 Set Scale，在 Known distance 字段中输入比例尺上指示的长度，然后单击 OK。然后点击 图片，然后调整 亮度/对比度，然后选择 自动.现在点击 图片，然后调整 阈值 并选择 自动.

单击魔杖工具，选择区域，然后按 Ctrl M.将面积值输入到毛囊 Z 分数计算器 Excel 文件中。将所有数据列在 Follicle Z-Score Calculator Excel 文件中后，转到同一 Excel 文件中名为 Z-Score Follicle Per Millimeter Cube 的工作表，以确定卵巢储备是否减少。儿童卵巢的表面上皮清晰可见，染色后卵巢储备位于其下方。

卵泡密度用于计算卵巢储备 Z 评分，Z 评分小于负 1.7 表示卵巢储备减少。