壳聚糖/dsRNA 纳米颗粒的制备，用于基于摄食的 RNA 干扰家蚕

首先，将 0.1 摩尔乙酸钠和 0.1 摩尔乙酸混合在 pH 值为 4.5 的去离子水中。然后在室温下用去离子水制备 100 毫摩尔硫酸钠缓冲液。称量市售壳聚糖，制备 0.02% 重量比溶液，并将其溶解在制备的 100 毫摩尔乙酸钠缓冲液中。

然后将 20 μg 双链 RNA 或 dsRNA 溶解在 50 μL 无核酸酶水中。将此溶液添加到 50 μL 硫酸钠缓冲液中，制成 100 μL dsRNA 溶液。接下来，将 100 微升制备的壳聚糖溶液加入 100 微升 dsRNA 溶液和 50 毫摩尔硫酸钠中。

混合后，将溶液在 55 摄氏度下加热 1 分钟。立即高速涡旋混合物 30 秒，以促进纳米颗粒的形成。在室温下以 13， 000 G 离心混合物 10 分钟，以获得白色颗粒。

将上清液转移到新鲜的 1.5 mL 试管中，让沉淀在室温下风干 10 分钟。使用微量分光光度计，测定上清液中 dsRNA 的浓度。要计算封装的 dsRNA 的百分比，请将上清液中剩余的量除以 dsRNA 的初始量。