我们感谢，黛安C.塞缪尔沃德奶昔和格雷戈里纳尔逊这种技术的先驱。我们感谢帕Kadandale和布赖恩Geldziler视频显示激活精子，有益的讨论Singson实验室成员;株和美国国立卫生研究院的总部大楼为我们支持通过授予（R01HD054681）。

1）男性人口的富集<ol><li>根据实验的需要，大量的男性可以得到采用以下策略之一： <ol><li>人口众多的野生型男性可OP50种子NGM板中心的一个小草坪上穿过5野生型男性和1雌雄同体。大约50％的后代子孙将野生型的男性。 </li><li> 他5（e1490）或他- 8（e1489）雌雄同体抛出大量的男性他和他的8男性肥沃的精子的形态和功能没有明显的缺陷。因此， 他或他的男性8例，可代替野生型的男性，许多实验使用。 </li></ol></li></ol> 2）识别和隔离的男性<ol><li>检查尾部形态的蠕虫，雄性蠕虫的尾巴是四舍五入。 </li><li>选择L4阶段的男性，他们转移到与E. NGM板种子大肠杆菌 OP50和让他们成长为一两天。雌雄同体的情况下成长独身者在男性防止精子的损失，因此大量的精子会在实验过程中。 </li><li>在一天的清扫，无细菌转移到NGM板独身的男性，并让他们爬几分钟。这一步，有助于消除 E.小层坚持对大肠杆菌的蠕虫病毒表面。另外，吸管M9的缓冲区（6克娜2 HPO 4，3G KH 2 PO 4，5G氯化钠，0.25克硫酸镁4 .7 H 2 O每公升）体积小，在手表玻璃和转移到缓冲区的男性。 </li></ol> 3）夹层的男性和体外活化<ol><li>载玻片和使用PAP笔标记一个小圆圈。吸取30-50μL精子中等1X（HEPES 50MM，25MM氯化钾，氯化钠45MM， 硫酸镁 1MM 5MM，10MM 氯化钙葡萄糖，pH值7.8）的圆圈内。疏水性循环，有助于保持在其边界内的精子中等。 </li><li> 5-10男性精子介质传输。 </li><li>在显微镜下观看的幻灯片，按住两个注射器连接你的手都与27表针。 </li><li>使用一根针“持有”的蠕虫和使用其他的针切男性结束后释放精子。 </li><li>切割的蠕虫病毒，通常排出的精子大量瞬间。精子是分钟“颗粒”的立体显微镜下可见。但是，有时部分或大部分的精子可能会保留在胴体。在这种情况下，轻轻地“拖”的载玻片上的胴体，可能有助于释放精子的胴体。 </li><li>要激活的精子细胞，解剖1X精子中等含链霉蛋白酶E（20μg/ml）的蠕虫，并让他们坐了5分钟。 </li><li>不要让幻灯片成为干在任何时间点的实验。如果需要添加更多的1X精子中等。 </li></ol> 4）可视化spermtids和精子<ol><li>解剖样品表面轻轻放在盖玻片。 </li><li>查找领域的精子在低倍率（10X） </li><li>迁移到更高的放大倍率 - 100X油浸通常可以观察到精子或精子的精细细节。 </li></ol> 5）代表性的成果 DIC的男性线虫分离出精子形象的一个例子是如图1所示。精子细胞是球形的细胞核突出，在体外激活精子，如图2所示。 <img src="/files/ftp_upload/2336/2336fig1.jpg" alt="图1" /> 图1 C. DIC的形象。 线虫精子细胞。 <img src="/files/ftp_upload/2336/2336fig2.jpg" alt="图2" /> 图2 在体外激活C. DIC的形象。 线虫精子。

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除了分析SPE突变体，该协议有其他重要的应用，如精子形态分析与衰老。使用此协议的精子细胞和精子分离出可用于在其他下游实验，如野生型和突变体的精子8，9，幻灯片10， 生理测量9，11，甚至人工授精12精子活力的免疫。

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Tuberculin syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>309623</td>
<td>Syringe: 1 ml, needle: 27G X &frac12; in</td>
</tr>
<tr>
<td>Pap pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zymed</td>
<td>00-8888</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>VWR VistaVision HistoBond Microscope Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR International</td>
<td>16004-406</td>
<td>Dimension: 75X25X1mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Cover glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR International</td>
<td>48366045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protease</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P-6911</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation and in vitro activation of caenorhabditis elegans sperm

男性和雌雄同体自然就找到了两种线虫线虫性形式。变形虫精子产生的男性和雌雄同体。在配子发生的早期阶段，雌雄同体的生殖细胞分化成精子数量有限 - 约300 - ，并存储在一个小的“袋”之称的精囊。后来，雌雄同体不断产生卵母细胞 1。相比之下，男性产生专其整个成年的精子。男性产生这么多的精子，它在一个典型的成虫 2细胞总数的50％帐户。因此，隔离来自男性的精子是较雌雄同体容易。 只有一小部分男性是自然产生自发的非分离的X 染色体 3 。隧道与男性或更方便，引入的突变引起他（男性的高发病率）表型的雌雄同体的一些战略，通过它可以丰富男性人口3。 男性可以很容易地区别于雌雄同体通过观察尾部形态4。指出，雌雄同体的尾巴，而雄性的尾巴是交配结构的圆形。 切割尾部释放广大男性生殖道内储存的精子。夹层使用27表针的立体显微镜下进行。由于精子是不是身体与任何其他细胞相连，液压排出内部的内容包括男性身体精子 2 。 男性有直接解剖上的“精子中等”的小降。精子细胞是敏感的pH值的改变。因此，HEPES，一种化合物具有良好的缓冲能力是精子媒体使用。葡萄糖和其他盐类存在于精子媒体帮助维持渗透压，保持精子的完整性。 被称为减数分裂后的精子细胞分化成精子的精子或精子激活。震撼5，6尼尔森先前表明，圆形精子细胞能够被诱导分化成精子，通过添加各种活性化合物，包括链霉蛋白酶大肠杆菌在这里， 我们证明在体外精子的C 线虫精子使用链霉蛋白酶E。 成功的精子是生育的先决条件，因此，在精子缺陷的突变体是无菌的。迄今几个突变体已被证明特别是在有缺陷的精子形成过程7。异常时，发现在体外激活新型SPE（有缺陷的精子）的突变体，将有助于我们发现参与此事件的其他球员。

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Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

一个来自男性的精子细胞的分离和激活的协议<em&gt; C。线虫</em&gt;这里描述。切割后结束精子的男性版本。蛋白酶此外，精子可以被激活。

分离和<em在体外激活线虫精子

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

isolation-and-in-vitro-activation-of-caenorhabditis-elegans-sperm

Research

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Biology

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

16.2K 次观看.  Rutgers University. 一个来自男性的精子细胞的分离和激活的协议 C。线虫这里描述。切割后结束精子的男性版本。蛋白酶此外，精子可以被激活。

分离和激活线虫精子