N.G.是法国"法国重建基金会"和菲利普基金会的奖学金获得者;R.S. 由露西尔·帕卡德儿童健康基金会和斯坦福NIH/NCRR CTSA奖号码UL1 RR025744支持;P.S. 得到马克斯·卡德基金会和奥地利科学院的马克斯·卡德研究金和奥地利科学基金（FWF）施罗德研究金的支持：J3399-B21：S.J.G. 承认来自国家卫生研究院的支持，资助 U19 AI104209、NS 080062 和加州大学烟草相关疾病研究计划;L.L.R. 承认关节炎国家研究基金会 （ANRF） 和国家卫生研究院资助 K99AI110645。

所有动物护理和实验都是按照国家卫生研究院的指导方针和斯坦福大学动物护理和使用机构委员会的具体批准进行的。
1. 骨髓衍生培养乳腺细胞（BMCMCs）的生成和特征。
注意：捐赠者BMCMC应该来自与接受MC缺乏小鼠具有相同遗传背景的骨髓细胞。雄性供体BMCMC不适合雌性小鼠的移植。女性衍生的捐赠者BMCMC将成功地融入男性和女性接受者。
<ol><li>骨髓提取。<ol>
<li>将无菌磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 倒入 6 个井培养板（每只小鼠 1 口井），并放在冰上。</li>
		<li>将解剖仪器浸泡在70%的乙醇中进行灭菌。</li>
		<li>通过吸入二氧化碳（CO2）然后进行颈椎脱位，然后用70%的乙醇在操作现场喷洒小鼠安乐死。</li>
		<li>使用无菌解剖仪器提取股骨、头骨和腓骨，而无需切割任何骨表皮。</li>
		<li>在用钳子固定骨骼时，用无菌剪刀（或手术刀片）刮掉骨头上的所有组织（并丢弃腓骨）。将骨骼放在 PBS 上，直到收集所有骨骼。</li>
		<li>在无菌组织培养罩中执行所有剩余步骤。使用无菌仪器，用钳子固定骨骼，并切断两个表皮，以暴露髓腔。</li>
		<li>使用 3 毫升注射器和 30 G 针头，以及冷冲洗介质（杜尔贝科改性鹰介质 [DMEM] 补充 10% 胎儿小腿血清 [FCS， 热灭活]， 2 mM L-谷氨酰胺， 1% 抗生素抗菌溶液， 50 μM β-mercaptoethanol）， 将红骨髓冲入培养皿中。</li>
		<li>使用相同的注射器通过反复的温和吸气和弹出来分离冲洗的骨髓细胞簇。</li>
		<li>将每只小鼠的股骨和二头肌骨髓池放入一个15毫升的离心机管中。用冷冲洗介质填充管子，在 4°C 下以 400 x g 5 分钟的速度清洗骨髓细胞和离心机 5 分钟。</li>
	</ol></li>
	<li>宝马文化。<ol>
<li>去除超自然，在10毫升培养介质中恢复盆栽骨髓细胞（DMEM补充10%胎儿小腿血清[FCS， 热灭活]，2米L-谷氨酰胺，1%抗生素抗菌溶液，50μM+-麦加托乙醇和20%WEHI-3细胞条件介质[作为IL-3的来源;或者使用重组小鼠IL-3在10 ng/ml]）。</li>
		<li>将细胞放在大小合适的组织培养瓶中（例如，T25代表1只小鼠，T75代表2只小鼠 等）。</li>
		<li>电镀细胞后1-2天，将介质和悬浮细胞（留下碎片和粘在烧瓶底部的粘附细胞）转移到新的烧瓶中，并添加新鲜培养介质（10毫升/鼠标）。</li>
		<li>在接下来的几周内，每3-4天喂一次细胞（每只小鼠添加10毫升培养介质）。保持2.5 x 105-1 x 106 细胞/毫升之间的细胞密度。每周将非粘附细胞转移到新的烧瓶中一次，直到培养瓶中不存在粘附细胞。 在用于体外 检测或移植到缺乏MC的小鼠之前，先测试细胞的成熟度（见下文）。 注：BMCMC的完全分化需要4-6周。</li>
	</ol></li>
	<li>评估 BMCMC 成熟度。<ol>
<li>
使用流细胞测量。
		<ol>
<li>在 5 毫升聚苯乙烯圆形底部管中使用冰冷 FACS 缓冲（PBS，0.5% FCS）清洗细胞（5 x10 4-5 x 10 5 细胞/条件）。离心机在400 x g 5分钟在4°C。 吸气超自然。</li>
			<li>在 FACS 缓冲区中稀释防鼠器 CD16/32（克隆 93 或 2.4G2）单克隆抗体 1：200 （2.5μg/ml）。在每个颗粒中加入 10 μl，然后通过短暂的漩涡来补充。在冰上孵化 5 分钟以阻止 Fc 绑定。 注意：保护样品免受所有剩余步骤的直接光。</li>
			<li>稀释植物素 （PE） 结合抗鼠标 Fc εRI α （克隆 MAR-1） 1：200 （1μg/ml） 和荧光素异硫氰酸酯 （FITC） 结合抗鼠标 KIT （CD117; 克隆 2B8） 1：200 （2.5μg/ml） （"染色溶液"）， 或在 FACS 缓冲器中分别标记的同型控制抗体 （"同型控制解决方案"）。</li>
			<li>将一半的阻塞细胞从步骤 1.3.1.2 分裂成额外的聚苯乙烯圆形底部管，并在一个管中加入 20 μl 的"染色溶液"，在另一个管中加入 20 μl 的"异型控制解决方案"。在冰上孵化30分钟。</li>
			<li>在 400 x g 下加入 3 毫升冰冷 FACS 缓冲器和离心机，在 4 °C 下 5 分钟。 丢弃超自然物，将颗粒重新喷入含有 1μg/ml 碘化物 （PI， 用于识别死细胞） 的 300μl FACS 缓冲器中。继续进行流动细胞学分析（见图2A）。</li>
		</ol>
</li>
		<li>使用托卢伊丁蓝色染色。<ol>
<li>在室温下，通过离心在 400 x g 下使用 PBS 清洗 1 x 105 个细胞 5 分钟，然后在 200μl 的 PBS 中吸气并重新吸附细胞。</li>
			<li>将细胞悬架转移到连接到显微镜幻灯片的预制细胞元件中，然后使用细胞中心燃料（40 x g 5 分钟）进行细胞离心处理。</li>
			<li>空气干燥滑动10分钟，用PAP笔在细胞周围画一个蜡圈。添加 0.1% 的托卢伊丁蓝色溶液以覆盖细胞。孵化1分钟。在自来水中清洗滑梯1分钟，然后空气干燥滑梯10分钟。</li>
			<li>使用安装介质覆盖滑动单元。继续进行光显微镜分析（见图2B）</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. 用BMCMC对乳腺细胞缺乏小鼠进行移植。
<ol><li>通过皮肤内注射（即）注射使耳朵受包。 注意：对于将BMCMC引入MC缺陷小鼠的耳钉的采用性转移，我们建议对每只耳针进行两次注射，每个细胞1 x10 6个细胞（共2 x10 6个细胞）。许多研究者在多个模型中都使用过将BMCMC引入MC缺陷小鼠耳钉的皮内移植，包括被动性皮肤过敏（PCA）24，27模型、宿主对毒液28的防御模型和慢性过敏反应（CHS）29，30。<ol>
<li>在冷 DMEM 中以 4 x 107 BMCMC/ml（1 x 106 BMCMC/25 μl）计算和补充细胞。将 BMCMC 解决方案转移到装有 30 G 针的 1 毫升注射器中。保持冰上，直到注射。</li>
		<li>使用异氟素（2.5%v/v）麻醉4-6周大的MC缺陷小鼠。通过脚趾捏检查麻醉深度，如果指示，调整异氟素，并在整个过程中继续监测呼吸和脚趾捏反应。使用眼药膏与Q提示，以防止眼睛干燥。</li>
		<li>使用食指，在耳钉的后部面部产生垂直压力，以暴露和伸展心室面部。</li>
		<li>将两个 25μl 即 BMCMC 溶液注射到耳针腹腔表面的两个不同部位，第一次注射在耳朵中间，第二次注射到耳针的尖端。在 体内实验之前 ，等待4-6周后。 注意：根据我们的经验，到那时，耳针中央部的MC/mm2 数量通常与野生型小鼠的相应位置相似，而耳针周围部的MC/mm2 数量通常大大低于相应的野生型小鼠27，28。在设计此类 MC 移植小鼠的实验时，应牢记这一点（例如，对 MC 功能可能产生影响的制剂应注射到耳钉的中心部分，并且对此类治疗效果的分析也应侧重于该区域）。</li>
	</ol></li>
	<li>腹膜腔通过内皮注射（即）注射而屈服。 注：通过将BMCMC转移到缺乏MC的小鼠的腹腔中，需要给每只小鼠注射2×106 个细胞。许多小组都利用这种将BMCMC注射到缺乏MC的小鼠身上，研究腹膜MC在各种模型中的作用，包括宿主防御毒液31 或细菌败血症32，33的模型。<ol>
<li>在冷 DMEM 中，以 1 x 107 BMCMC/ml（2 x 106 BMCMC/200 μl）计算适当的细胞数量并重新发送。将 BMCMC 解决方案转移到装有 25 G 针的 1 毫升注射器中。保持冰上，直到注射。</li>
		<li>将 200μl BMCMCs 溶液注射到 4-6 周大的 MC 缺陷小鼠的腹腔中。在 体内实验之前 ，在i.p.移植后等待4-6周。</li>
	</ol></li>
	<li>静脉注射（即注射）。 注：通过注射到缺 MC 小鼠中，BMCMC 的采用转移需要每只小鼠注射 5 x 106个细胞。许多小组已经使用静脉注射BMCMC到MC缺乏小鼠，以研究MC在各种疾病模型中的作用，包括膀胱感染34模型，哮喘35，肺纤维化36，抗体介导关节炎37。<ol>
<li>在冷 DMEM 中计算适量的细胞，并以 2.5 x10 7 BMCMC/ml（5 x10 6 BMCMC/200μl）进行再喷销。将 BMCMC 解决方案转移到装有 30 G 针的 1 毫升注射器中。保持冰上，直到注射。</li>
		<li>使用异氟素（2.5%v/v）麻醉4-6周大的MC缺陷小鼠。通过脚趾捏检查麻醉深度，如果指示，调整异氟素，并在整个过程中继续监测呼吸和脚趾捏反应。使用眼药膏与Q提示，以防止眼睛干燥。</li>
		<li>将 200μl BMCMC 溶液注入 MC 缺陷小鼠的尾静脉（或者，或者，逆轨道静脉）中。在 体内实验之前 ，在i.v.移植后等待12周。</li>
	</ol></li>
</ol>3. 对受精的桅杆细胞缺乏小鼠的分析。
<ol><li>耳部移植分析。<ol>
<li>在实验结束时，通过CO2 吸入对小鼠实施安乐死，然后进行宫颈错位。</li>
		<li>隔离耳针，固定在10%（vol/vol）缓冲形式在4°C过夜。 将固定耳针嵌入石蜡中，切开 4 μm 部分耳针，并安装在玻璃滑梯上。</li>
		<li>在室温下用 0.1% 的托卢伊丁蓝色溶液染色滑梯 1 分钟。在自来水中清洗滑梯1分钟，然后在室温下将空气干燥滑梯洗10分钟。</li>
		<li>使用安装介质的盖滑动，然后使用光显微镜计算每个针头部分的镶有MC的数量。通过比较受 包小鼠 与野生小鼠耳皮中MC的百分比和分布来评估移植效率。</li>
	</ol></li>
	<li>腹腔移植分析。<ol>
<li>评估腹腔中的桅杆细胞数量。<ol>
<li>在实验结束时，通过CO2 吸入对小鼠实施安乐死，然后进行宫颈错位。小心地去除小鼠的腹腔皮肤，而不会破坏腹腔。</li>
			<li>使用配备 25 G 针的 5 毫升注射器在腹腔中注射 5 毫升冷或室温 PBS。使用冷PBS来降低激活腹膜细胞的风险（这在评估腹膜MC脱粒或腹膜熔岩液中某些MC衍生产品的水平时非常重要）。对腹部进行20秒的按摩，以收获腹膜细胞。</li>
			<li>使用配备 22 G 针的 5 毫升注射器慢慢吸气腹膜。记录吸气洗衣的体积（预计可恢复高达注入量的 80%）。</li>
			<li>将腹腔熔岩液转移到 5 毫升聚苯乙烯圆形底部管和离心机中，在 4°C 下 5 分钟 400 x g。 吸气超自然。在 400μl 冷 PBS 中恢复颗粒。</li>
			<li>使用血细胞计室计算腹膜细胞总数。使用细胞悬浮的一半进行流动细胞学分析（如步骤 1.3.1 中所述），以评估腹腔中受陷的 MCs 的百分比和标记表达。将腹腔细胞总数乘以MC的百分比，以获得腹腔MC的绝对数量。</li>
			<li>执行细胞集中处理与步骤 1.3.2.2 中描述的剩余细胞。空气干燥在室温下滑动10分钟，并用PAP笔在细胞周围画一个蜡圈。</li>
			<li>用未稀释的梅-格伦瓦尔德染色溶液覆盖细胞5分钟，然后在PBS中清洗5分钟，均在室温下。用Giemsa污渍覆盖细胞，用除离子水稀释1：20，在室温下孵育20分钟。在自来水中清洗滑梯2次1分钟，然后空气干燥滑梯。</li>
			<li>使用安装介质覆盖滑动单元，并使用光显微镜（通过计算至少 400 个总细胞）计算被灌装的 MCs 的百分比。通过比较被围困小鼠 与 野生小鼠腹腔厕所中的MC百分比来评估增殖效率。</li>
		</ol>
</li>
		<li>对机械窗中桅杆细胞的评估。<ol>
<li>继步骤 3.2.1 中描述的腹膜后，切开腹膜以暴露小鼠的肠道。将每个鼠标的 4 到 5 个感官窗口排列到幻灯片上。</li>
			<li>在室温下将滑梯固定在卡诺伊溶液（3：2：1卷/卷/伏乙醇、氯仿和冰川醋酸）中 1 小时。空气干燥滑动并移除肠道（固定的中位窗口将保持连接到滑梯上）。</li>
			<li>用 Csaba（阿尔西亚蓝/萨夫拉宁 O）染色溶液在室温下将准备时间染色 20 分钟。<ol>
<li>要制作 500 毫升 Csaba 污渍，通过混合 100 毫升 1 M 醋酸钠溶液和 120 毫升 1 M HCl 来制作 500 毫升醋酸缓冲液，用除离子水制作最多 500 毫升，并将 pH 调整为 1.42。然后，溶解 90 毫克 Safranin [识别红色中的'成熟 MCs]，1.8 g 阿尔西亚蓝色 [识别蓝色中的'不成熟的 MCs] 和 2.4 g 硫酸铵 NH4Fe （SO4）2到 500 毫升醋酸盐缓冲器。</li>
			</ol>
</li>
			<li>使用安装介质的盖滑动，然后使用光显微镜计算每个感官窗口的镶有MC的数量。通过比较被灌 装小鼠 与野生小鼠的间质窗口中MC的百分比和分布来评估增生效率。</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>I.v. 恩格拉夫特分析。<ol>
<li>在实验结束时，通过二氧化碳 吸入和宫颈错位对小鼠实施安乐死，并收获感兴趣的组织（如 肺、皮肤或脾脏），并在4°C的10%（vol/vol）缓冲形式素中过夜固定。</li>
		<li>将固定组织嵌入石蜡中，切开 4 μm 部分，并安装在玻璃滑梯上。在室温下用 0.1% 的托卢伊丁蓝色溶液染色滑梯 1 分钟。在自来水中清洗滑梯1分钟，然后空气干燥滑梯10分钟。</li>
		<li>使用安装介质进行盖滑动，并使用光显微镜评估每个组织部分的受包MC的数量和分布。</li>
	</ol></li>
</ol>

作者没有什么可透露的。

在最初的描述38年之后的近30年，"桅杆细胞敲击"方法继续提供有价值的信息，说明MC在体内可以做什么或不能做什么。长期以来，人们一直认为MC的功能仅限于它们在过敏症中的作用。使用"桅杆细胞敲击"方法生成的数据改变了这一观点，通过提供证据，证明MC除了其他功能外，可以在宿主防御某些病原体4，39或毒气28，31方面发挥关键作用，甚至可以抑?...

乳腺细胞（MCs）是由多能骨髓祖先1-3产生的造血细胞。骨髓外泄后，MCs祖先迁移到各种组织，在当地生长因子1-3的影响下发育成成熟的MC。组织驻地MC战略性地位于主机环境界面，如皮肤、气道和胃肠道，它们作为抵御外部侮辱的第一道防线。MCs 通常根据其"基线"表型特征及其解剖位置进行子分类。在小鼠中，有两种类型的MC被描述："结缔组织型"MC（CTMC）和粘体MC（MMCs）1-3，7，8。CTMC通常位于静脉注射器和神经纤维附近，并居住在血清腔中，而MMC在肠道和呼吸粘膜1-3中占据腹腔内位置。
研究9-13年MC的生物功能，已应用多种方法。许多小组都专注于使用细胞系的体外方法（如人类MC线HMC114或LAD215，16）、体外衍生MC（如人类外周血源性MC17，或小鼠骨髓衍生） 培养的MC [BMCMCs]18，胎儿皮肤衍生MC [FSCMCs]19和腹腔细胞衍生MC [PCMC]20）或来自不同解剖站点的前体内分离的MC。所有这些模型被广泛用于研究MC生物学的分子细节，例如MC激活中涉及的信号通路。然而，MCs生物学的一个重要方面是，它们的表型和功能特征（如细胞质颗粒蛋白酶含量或对不同刺激的反应）可以通过解剖位置和微环境2，7进行调节。由于在体内遇到的这些因素的确切混合物可能很难在体外繁殖，我们赞成使用体内方法来深入了解MC功能9。
存在一些具有遗传 MC 缺陷的小鼠菌株，例如广泛使用的 WBB6F1-套件W/W-v或 C57BL/6-套件W-sh/W-sh小鼠。这些小鼠缺乏KIT（CD117）的表达和/或活性，KIT是主要MC生长因子干细胞因子（SCF）21，22的受体。因此， 这些小鼠有一个深刻的MC缺陷，但也有额外的表型异常有关他们的c-套件突变（在WBB6F1-套件W/W-v小鼠）或大染色体反转的影响，导致减少c-套件表达（在C57BL/6-套件W-sh/W-sh小鼠）9，10，12，23。最近，一些具有c-套件独立构成MC缺乏症的小鼠株被报告为24-26。所有这些小鼠和一些额外的新型诱导MC缺陷小鼠最近已详细审查9，10，13。
在这里，我们描述了小鼠骨髓衍生培养MC（BMCMCs）的生成方法，它们被收养转移到缺乏MC的老鼠，以及不同解剖部位对收养转移的MC的数量和分布的分析。这种所谓的 "桅杆细胞敲击" 方法可用于评估MC和MC衍生产品 在体内的功能。我们根据近年来开发的替代方法讨论了这种方法的优点和局限性。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Antibiotic-Antimycotic Solution</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>30-004-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml Syringe</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>309656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm x 10 mm Dish</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>430588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Polystyrene Round Bottom Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid Glacial</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A35-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue 8GX</td>
			<td>Rowley Biochemical Danver</td>
			<td>33864-99-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allegra 6R Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD16/32 (clone 93) Purified</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-0161-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1 ml TB Syringe</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 22G x1 (0.7 mm x 25 mm) Needles</td>
			<td>BD Precision Glide Needle</td>
			<td>205155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25G 5/8 Needles</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 30G x1/2 Needles</td>
			<td>BD Precision Glide</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue MAX Jr, 15 ml Polypropylene Conical Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal 60 Mounting Medium</td>
			<td>Richard-Allan Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin3</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DakoCytomation pen</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) 1x</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>15-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E 7023-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum Heat Inactivated</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F4135-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Conjugated IgG2b K Rat Isotype Control</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-4031-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein Isotiocyanate (FITC) Conjugated Anti-mouse KIT (CD117; clone 2B8)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-1171-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>F79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Giemsa Stain Modified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>GS-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>29405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>May-Grunwald Stain</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>MG-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell 6 well plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35 3046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus BX60 Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus Tissue Embedding Medium</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>23-021-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Conjugated IgG Armenian Hamster Isotype Control</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-4888-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered-Saline (PBS) 1x</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phycoerythrin (PE) Conjugated Anti-mouse FceRIa (clone MAR-1)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-5898-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide Staining Solution</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-6990-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IL-3</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>213-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranin-o Certified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flasks T25 25 cm2</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>353109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flasks T75 75 cm2</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>353110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine Blue 1 % Aqueous</td>
			<td>LabChem-Inc</td>
			<td>LC26165-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse SCF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>250-03</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing the functions of mast cells in vivo using 'mast cell knock-in' mice

乳腺细胞 （MCs） 是存在于各种组织的造血细胞，在暴露于外部环境（如皮肤、气道和胃肠道）的部位尤为丰富。以在IgE依赖过敏反应中的有害作用而闻名的MC也成为主机防御毒液和入侵细菌和寄生虫的重要参与者。MC表型和功能可能受微环境因素的影响，微环境因素可能因解剖位置和/或根据免疫反应的类型或阶段而异。因此，我们和其他人 倾向于在体内 方法而不是 体外方法， 以获得对MC函数的洞察。在这里，我们描述了小鼠骨髓衍生培养MC（BMCMCs）的生成方法，它们被收养转移到基因缺MC的小鼠，以及不同解剖部位对收养转移的MC的数量和分布的分析。这种方法，被称为"桅杆细胞敲击" 的方法，已经广泛使用在过去30年评估MC和MC衍生产品的 功能在体内。我们根据近年来开发的替代方法讨论了这种方法的优点和局限性。

图1中概述了"桅杆细胞敲击"方法，包括BMCMCs的生成、应移植到缺MC小鼠体内的细胞数量（如果根据实验设计指示，数量可以有所变化）和根据注射部位的增殖和实验之间的间隔（如果指示，此间隔也可能有所不同：例如，MC细胞质颗粒中存储的调解员的内容随着时间的增加而稳步增加。图2显示DMEM介质中含有20%WEHI-3细胞条件介质作为IL-3来源的具有代表...

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Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using &#039;Mast Cell Knock-in&#039; Mice

我们描述了体 外 衍生桅杆细胞的生成方法，它们被移植到乳腺细胞缺乏的小鼠中，以及不同解剖部位对网状桅杆细胞的表型、数量和分布的分析。此协议可用于评估桅杆细胞 在体内的功能。

使用"桅杆细胞敲击"小鼠分析体内桅杆细胞的功能

Mast cells (MCs) are hematopoietic cells which reside in various tissues, and are especially abundant at sites exposed to the external environment, such ...

analyzing-functions-mast-cells-vivo-using-mast-cell-knock

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

10.1K 次观看.  Stanford University School of Medicine. 我们描述了体 外 衍生桅杆细胞的生成方法，它们被移植到乳腺细胞缺乏的小鼠中，以及不同解剖部位对网状桅杆细胞的表型、数量和分布的分析。此协议可用于评估桅杆细胞 在体内的功能。