骨关节炎是老年人口最常见的衰弱性疾病之一。目前，骨关节炎的根本原因还没有明确的治疗方法。此临床协议描述了一种创新程序，通过再生软骨（如组织）来治疗人类膝盖骨关节炎，进行有希望的微创和替代治疗。
骨关节炎是老年人口最常见的衰弱性疾病之一。目前，还没有明确的治愈骨关节炎的突出原因。此临床方案是一个创新的程序，通过再生软骨样组织，为人类膝盖骨关节炎提供有希望的、微创的和替代性治疗。
将患者带进带生物危害 A 类机罩的手术室，并将患者放在一个超前位置。用5%的β丁-波维丁碘清洁患者的腹部区域，并使用无菌技术将患者覆盖，露出腹部的清洁区域进行抽脂。大约五厘米的横向从脐带，麻醉两个部位，一个在左边，另一个在右侧的切口的凹面。
使用两毫升2%利多卡因，无肾上腺素与25量1.5英寸的针头在5毫升注射器中，通过注射每个位点在表皮水平。麻醉切口部位，使用五毫升的肿瘤溶液和10毫升注射器和针头25规格1.5英寸。通过捏皮提高皮下水平的深度，横向将两个 0.5 厘米的切口（大约低于乌姆比利）约 5 厘米。
使用数字11刀片，帮助凸起的皮肤穿透到皮下水平，但不穿透腹部壁。通过使用20厘米60米的大麻，麻醉整个下腹部区域的皮下水平，这是抽脂与700至800毫升的肿瘤溶液。在用肿瘤溶液完成整个下腹部的渗透后，通过将连接到60毫升或30毫升注射器的3.0毫米管杆连接到用于手动抽脂或专门设计的3.0毫米管连接到离心机套件，准备抽脂装置。
一种由我们自己开发并经FDA CDRH批准的封闭系统注射器，用于保持无菌与真空吸脂机相连。进行抽脂，获得100至110克脂肪组织，不包括肿瘤溶液。进行抽脂时，脂肪组织将连同肿瘤溶液一起获得，但应分离和去除。
为了首先通过重力分离肿瘤溶液，离心机套件中的脂肪组织可以转移到60毫升的注射器中，然后放下注射器。例如，注射器的开口部分位于底部。通过等待五到六分钟，脂肪组织和肿瘤溶液将被分离。
通过按下注射器柱塞顶部，取出注射器底部的液体。执行上述步骤9至11，直到共100克至110克脂肪组织脂气每膝已累积。在按重力分离肿瘤溶液并每60毫升离心机套件积累50克至55克脂质吸气后，将两个离心机套件放入离心容器桶中，在1600 G下旋转5分钟，凝结脂质吸气，将液体从脂肪组织分离。
这个过程进一步凝结脂质吸气，在某些情况下可能会产生脂肪油。注意不要摇晃，拆下离心机套件底部的安全盖和插头。缓慢向下推离离心套件柱塞顶部，拆下底部液体。
在单独的60毫升注射器上，溶解10毫克胶原酶，5毫克胶原蛋白酶特异性结缔组织，5毫克胶原酶特异性脂肪组织与50毫升的正常盐水。使用专用连接器将 60 毫升注射器连接到离心机，将大约 25 至 30 毫升的浓缩脂质吸附与溶解的胶原酶、5 毫克专用的结缔组织胶原酶和 5 毫克胶原酶，以一比一、体积与体积的比例混合。使用杆或推杆将 60 毫升注射器和离心机套件之间的含量推，彻底混合以凝结预吸气和胶原酶。
将吸脂剂和胶原酶的混合物转移到60毫升注射器。将每个含有混合物的 60 毫升注射器与含有刀片的组织均质器连接。将空的 60 毫升注射器连接到均质器的另一端。
通过均质器将混合物推入其他 60 毫升注射器 4 至 6 次，从而切割和切碎脂质吸气。通过专用连接器将均质脂吸气和胶原蛋白混合物转移回 60 毫升离心机套件。将离心机套件放在容器中，放入在 37 摄氏度预热的培养箱中。
在 37 摄氏度下用均质混合物孵育两个离心机套件 40 分钟，同时以 45 rpm 转速旋转。孵育40分钟后，以无菌方式将容器从孵化器中取出。然后取出离心机套件并将其放在离心机中。
将混合物在800 G下离心5分钟，分离脂肪组织衍生的SVF。离心机后，通过取出柱塞顶部的注射器盖，并通过注射器锁连接将30毫升注射器放在柱塞开口上，从每个离心机套件中去除上一代，包括胶原酶和消化的脂肪组织。缓慢地按下 30 毫升注射器的桶部分，使上看液填充到 30 毫升注射器中。
一直按下30毫升注射器筒，一直压到离心机套件底部的最后三到四毫升，只留下最后三到四毫升的脂肪组织衍生SVF。上则被丢弃。从柱塞顶部取出 30 毫升注射器，并给注射器加注 5%葡萄糖乳酸环环器溶液，也称为 D5LR。
通过将装有D5LR的30毫升注射器固定在柱塞开口顶部，将含有3至4毫升脂肪组织衍生SVF的离心机套件填充，并加注D5LR至55毫升。然后取出 30 毫升注射器，盖住柱塞开口，并在 300 G 下再次将离心机套件离心约 4 分钟。重复步骤 17 到 21，总共进行四次洗涤。
第四台离心机后，为了获得用于喷射的最终 SVF，请拆下离心机套件底部开口的安全盖和插头，而不摇晃或转动离心机套件。使用专门设计的连接器将 20 毫升注射器连接到离心机套件底部开口。来回多次拉动 20 毫升注射器的柱塞，以摇动已稳定在离心机套件底部的细胞。
去除含有 AST 和 ECM 以及其他细胞和组织所需的 SVF 总体积。通常从每个离心机套件中约三到四毫升用于膝关节注射。我们做了30毫升的自体血和2.5毫升的抗凝血酸化脱酸葡萄糖溶液。
然后，抽血被转移到60毫升离心机桶包。然后，在730重力下离心5分钟。和上一代被移除，并放入一个新的60毫升离心机桶套件。
上那液在1350重力下离心4分钟，获得4.4毫升PRP。用5%的β丁清洁患者的膝盖，并无菌地披上。为三元骨和股骨之间的关节空间，将膝盖前部的关节空间置换。
用稀释的利多卡因（lidocaine）表面麻醉注射部位，用四毫升正常盐水稀释1%利多卡因的一毫升，从皮肤到关节胶囊外。然后用稀释的罗皮瓦卡因内麻醉关节胶囊内部，用三毫升的正常盐水稀释一毫升0.75%罗皮瓦卡因。将两毫升HA混合到20毫升注射器中20毫升的SVF中，通过注射器将注射器连接到注射器接头。
通过使用注射器注射器连接器，在已经准备并准备并在五毫升注射器中准备的三到四毫升自体 PRP 中加入 0.4 毫升氯化钙。将 3.5 至 4.5 毫升 PRP 氯化钙加入 5 毫升注射器中，将 8 至 10 毫升 HA-SVF 混合物加入 20 毫升注射器中，通过注射器将注射器与注射器接头混合。立即将混合物（约12至15毫升）缓慢注射到膝关节前，使用38毫米18表针，带或不带超声波指导。
注射后，通过折叠4x4棉纱布四次，并将胶带放在折叠的4x4纱布上，用压力包扎注射部位。指示患者保持静止60分钟，以允许细胞附着。指示患者在出院后将活动限制在最少一周内。
返回诊所，在三周内再注射三次由氯化钙激活的PRP。第三阶段OA的患者接受了协议部分所述的治疗。在 ASV-ECM 混合物注射的第二周后，患者的疼痛和ROM得到改善。
到第16周，患者的疼痛和ROM明显改善了超过70%的治疗后MRI，在第16周后采取，显示软骨样组织在膝盖的内侧增加厚度。另一名具有第三阶段OA的患者接受了协议部分所述的治疗。在 ASV-ECM 混合物注射的第二周后，患者的疼痛和ROM得到改善。
到第18周，疼痛和ROM明显改善到80%重复的MRI后，第18周显示，软骨样组织的高度在膝盖的前部侧增加。第三阶段OA的第三名患者接受了协议部分所述的治疗。在第二周的 ASV-ECM 混合物注射后，患者的疼痛和ROM在第22周时改善了约50%，疼痛和ROM明显改善超过80%的重复MRI后，第22周显示，在膝盖的中侧软骨样组织的高度增加。
目前没有用于治疗OA的治疗方法。然而，使用 ASCs 和均质 ECM 进行干细胞治疗的皮下注射，以及用氯化钙激活的 HA 和类似 PRP，可为当前治疗膝关节 OA 的治疗提供替代方案。
