可视化协议为更广泛的防御和真菌生长蚂蚁的研究提供了参考框架。这种方法的主要优点是，它可以帮助研究人员识别关键的防御行为，以确保对未来工作的共同理解。对于不熟悉这些行为的年轻研究人员来说，研究真菌生长蚂蚁的参考可能特别有用。
其中一些行为并不常见，因此有经验的研究人员可能从未观察到这些行为。本指南将说明关键防御行为以及一致定义，从而促进研究和蚂蚁物种之间的比较。此外，了解受控条件下的行为将有助于研究自然栖息地，那里的条件很难控制。
首先，将埃斯科沃普西斯菌株从Acromyrmex紫锥菊菌菌群中分离，将真菌花园碎片与蚂蚁去除，在用湿润棉布的培养皿上放置数天，直到埃斯科莫普西斯发芽和孢子。将孢子转移到马铃薯葡萄糖糖板中，在大约23摄氏度的温度下孵育两周。使用无菌针头，从板中去除成熟的孢子。
然后，在无菌条件下接种新盘上的孢子，并在约23摄氏度下孵育两周。当催眠诗已经生长到覆盖整个板并进入成熟的棕色孢子时，在无菌条件下将孢子接种到新板上。使用三个原始的A.Echinatior殖民地，从每个父殖民地获得总共36个分殖民地，每个父殖民地有12个子殖民地。
在蚂蚁介绍前四小时，在原殖民地的真菌园中加入一茶匙大小的一块，一些荆棘叶，以及一块水浸的棉布。对于要感染的亚菌落，用埃斯科莫普西斯孢子填充接种循环。然后，通过轻轻敲击真菌花园的一小部分10至20次来接种孢子。
对于控制亚菌落，通过利用无菌接种循环10至20次敲击真菌园，模拟Escovopsis孢子的应用。对于感染后72小时的观察，在引入Escovopsis后72小时内，让一半的亚菌群不受干扰。对于感染后零小时的观察，在记录前 30 分钟，立即将两名育雏、四名未成年工人和来自父殖民地的四名主要工人添加到每个包装盒中。
然后，在记录前 30 分钟将相同的工作人员混合物添加到感染后 72 小时的观察中。对每个子殖民地执行四小时的视频录制。在记录了所有 36 个子殖民地后，查看录像并评分每个子殖民地中每个人感兴趣的行为。
以下剪辑描述了观察期间要观察到的关键不同行为。在查看视频时，请注意蚂蚁是否停止腿部运动以启动自我梳理。检查以确保天线通过前腿上的天线清洁器。
然后，蚂蚁应该用嘴部清洁腿部和天线清洁剂。此外，请注意，如果蚂蚁停止任何腿运动在真菌花园的固定点。观察天线是否静止且平行，指向真菌，并几乎靠近下形的尖端相互接触。
然后，光泽应该出现舔真菌。一个或多个蚂蚁也可能互相梳理。在这种行为期间，蚂蚁停止所有运动，并密切站在一起，保持身体接触。
然后，梳理蚂蚁应指向接收蚂蚁的天线，轻轻点击接收器。请注意，梳妆个体的上部和下口部分打开，光泽出现舔接收器蚂蚁。观察蚂蚁何时停止运动以启动元体腺梳理。
蚂蚁应该靠在一边，并达到其前腿之一背部擦腺体的开口，同时舔另一个前腿与光泽。然后，蚂蚁将重复与相反的腿的行为。当蚂蚁在真菌花园的固定点上停止腿部运动时，请注意天线是一动不动的平行的，指向真菌花园的固定点。
然后，蚂蚁将抓住可见的埃斯科沃普斯孢子，并把它们从巢中抬出来。蚂蚁也可以在真菌的固定点上停止腿部运动，将天线松散地指向一块真菌，然后用天线敲击真菌片。在此之后，蚂蚁会从真菌作物的其余部分分离出一块真菌。
当蚂蚁在真菌花园的固定点停止腿部运动时，可能会观察到另一种潜在的行为。蚂蚁将弯曲其气管和头对对方，以应用一滴粪便液到其嘴部。蚂蚁会一次一个，它会拉它的前腿通过门面，天线通过天线清洁器。
本研究的主要目的是创建一个短剪辑目录，说明切叶蚂蚁的疾病防御行为。协议中描述的行为在实验感染场景中得到评分。在控制殖民地，小工人比主要工人更培养花园作物。
在受感染的菌落中，与控制菌落相比，真菌培养增加的趋势不显著。粪便梳理的显著增加与感染有关，但没有发现未成年人和主要工人的区别。孢子杂草和真菌杂草的频率都很低，在受感染的菌落和控制者之间没有显著差异。
自从观察到感染以来，真菌杂草的杂草呈上升趋势。在4小时的观察期之后，很少有早期感染的感染菌落有明显的孢子。有趣的是，在后期感染条件下，蚂蚁不能完全去除任何菌落中的孢子。
因此，这个实验的结果是一个说明性的例子，说明如何使用剪辑的汇编用于行为研究，以计算次要和主要工作行为的平均频率。我们记录了有助于真菌生长蚂蚁防御的行为，并在胶片上系统地识别、描述和捕获了这些行为。我们的研究结果加强了该领域的研究，表明为什么病原体在面对大量行为和相关抗微生物化合物时很难感染菌落。
我们为该领域的未来工作提供了一个新的工具，并希望行为目录在获得共识和简化行为定义、观察和解释方面将证明是有价值的。
