Primaquine 是一种著名的抗疟疾药物。生物流体中原始基的测定通常需要评估药代动力学。目前，Primaquine 测定的主要技术基于 HPLC。
HPLC 的过程可能相当复杂且耗时。因此，该方法为快速检测Primaquine提供了一种简单的方法。这种格里斯方法可能是Primequine定量的最简单、最具成本效益的方法。
此外，这种方法可以提供肉眼Primaquine检测的可能性，而无需任何设备。除了血清和尿液样本外，这种方法还可用于定量测定制药配方中的Primaquine，例如，在片剂中测定Primaquine用于制造质量控制。演示这个程序的将是吴亚兰小姐和吴胜军，两个研究生从我实验室。
首先在25毫升棕色底瓶中溶解0.1毫摩尔的甲胺和二磷酸的10毫升5%磷酸溶液。将烧瓶放在冰浴上，并加入搅拌棒。然后把冰浴放在搅拌盘上。
溶解6.9毫克硝酸钠和1毫升冷却水，然后滴入烧瓶中。拆下冰浴，使反应混合物在室温下搅拌。使用硅胶涂层、薄层色谱或TLC板，使用二氯甲烷甲醇混合物作为亚致剂，监测反应。
azo 产品在 TLC 板上显示有色斑点。当 PMQ 斑点消失时停止反应。将反应混合物的pH调至大于10，在冰浴中加入氢氧化钠溶液。
然后，使用50毫升分离漏斗三次提取混合物，每提取20毫升乙酸乙酯。完成后，使用旋转蒸发器将有机相混合并浓缩在真空中。在正常压力下使用反相硅胶的闪光色谱净化残留物。
然后，通过冻干干燥溶液，获得所需的佐产品。要测量紫外吸收光谱，将纯亚佐溶解在蒸馏水中或5%磷酸中，并使用分光光度计在室温下记录吸收光谱。要测量PMQ吸收，首先在0.2摩尔氯化氢中溶解4-甲基苯丙酸碱，以进行200毫摩尔苯丙酸素溶液。
然后在蒸馏水中溶解亚硝酸钠，获得五毫摩尔溶液。将溶液温度控制在摄氏四度。将 100 微升的 Aniline 溶液添加到 96 孔板中。
然后添加 50 微升含 PMQ 样品，并将其与 aniline 混合。将50微升亚硝酸钠溶液加入板中，通过移液混合内容物。将板在室温下保持 15 分钟，然后在 504 纳米下测量溶液的吸光度。
将数据导出为电子表格文件以进行进一步分析。要为尿液样本中的 PMQ 测量构建校准曲线，请以零、一、二、五、10、20、50、100 和 200 微摩尔的浓度在合成尿液中准备 PMQ 溶液。准备 PMQ 检测反应，并测量如前所述的吸光度。
然后根据 504 纳米吸光度和 PMQ 浓度生成校准曲线。从测试测量中减去不带 PMQ 的样品的吸光度值，并执行线性拟合以生成线性方程 y 等于 x 加 b，其中 y 是吸光度和 Tens，x 是 PMQ 的浓度。要构建人血清样本中PMQ测量的校准曲线，在人血清中准备PMQ溶液，PMQ浓度为零、一、二、五、10、20、50、100和200微摩尔。
准备 PMQ 反应。测量吸光度，并构造如前所述的校准曲线。在15毫升离心管中加入6毫升7至1乙酸乙烷六烷，加入两毫升含PMQ的血清中。
在萃取系统中加入100微升的两个摩尔氢氧化钠溶液，并旋转管30秒。然后，收集有机层，并在真空下用旋转蒸发器浓缩。将残留物溶解在200微升蒸馏水中，并通过圆盘状、220纳米孔径大小的膜过滤，去除不溶性脂质成分。
在蒸馏水中构建PMQ的校准曲线，然后如前面所述，在96井板中用萃取溶液准备检测反应，并测量吸光度。然后，根据校准曲线中的线性方程确定PMQ的浓度。反应条件通过使用各种 anilines 与 PMQ 通过格里斯反应进行组合而得到优化。
进行了理论计算，结果与光学测量结果一致。由于4-甲基苯丙酸碱性能好，反应速率好，产品溶解度好，稳定性好，因此被确定为PMQ检测反应的最佳值。此外，4-甲基苯丙酮的亚佐产品是红色的，很容易用肉眼区分。
测试了pH对紫外抗对亚佐产品和PMQ溶液吸收的影响。虽然将 pH 从 1.0 提高至 7.0 不会改变吸光度，但基本 pH 具有显著的影响。为尿液和血清样本中的PMQ检测而构建了校准曲线。
当PMQ在尿液中范围从零到200微摩尔，在血清中从10微摩尔到200微摩尔时，就发现了线性关系。为了模拟真正的含PMQ血清，PMQ被添加到人血清中，浓度为0，0.2，0.5，1.0，2.0微摩尔浓度。使用本协议，回收的浓度为0.02、0.14、0.44、0.90和1.78微摩尔，导致浓度超过0.5微摩尔的浓度回收90%。
应当指出，反应达到饱和强度的时间取决于温度。通常，10 到 20 分钟足以使温度在 20 到 30 摄氏度之间。然而，总结我们格里斯化学的例子，用于原始奎恩检测。
类似的设计也适用于具有与原始元素相似的化学反应性的其他相关分子。
