这种产生流感病毒PP并确定其感染率的技术可以简化BSL-2城市流感病毒的研究。我们根据 PPS 的 qRT-PCR 数据对感染的 PPS 进行规范化。对两个糖蛋白表达质粒进行编码，可以简化病毒再感染的研究。
细胞播种后一天，在倒置的光显微镜下检查细胞形态和密度。理想情况下，细胞在转染时应大约为85%的汇合。每井用一毫升无血清DMEM代替介质，然后将盘子放回培养箱中。
对于每一个细胞的转染井，稀释8微升的转染试剂到150微升的体积与减少血清介质。轻轻混合溶液，让它在室温下坐五分钟。同时，将2.5微克质粒DNA稀释成158微升的血清介质。
经过5分钟的孵育，将稀释的DNA与稀释的转染试剂混合，轻轻混合溶液，在室温下保持15分钟。将脱氧核糖核酸脂复合物加入到相应的孔中，与无血清介质中的细胞一起加入。然后来回摇晃，轻轻混合盘子。
在37摄氏度和5%的二氧化碳下孵育4至6小时。孵育后，取出介质，每井用两毫升DMEM代替。然后再孵育36至48小时。
每井1万个细胞和96个井板播种每种类型的易感细胞。然后在37摄氏度和5%的二氧化碳孵化器中过夜。在转染后的第三天，检查应浅粉色或微橙色的介质颜色，并在 440 至 460 纳米波长下用倒置荧光生物显微镜检查细胞。
转染后38至48小时，通过0.45微米聚乙烯氟化物滤芯将pseuotype颗粒或PPS通过，将其清除细胞碎片，然后将其分成小体积的等分物，储存在零下80摄氏度。为了量化PPS，将30微升纯化病毒颗粒转移到1.5微升无RNase管中，并加入1微升的苯松酶核酸酶。在37摄氏度下孵育管子一小时，以消除任何DNA和RNA污染。
孵育后，将样品冷冻至零下70摄氏度，以活性核酸酶，并加入两微升蛋白酶K.孵育混合物30分钟，消化包络蛋白并释放CMV-GFP RNA。然后在100摄氏度下使蛋白酶K处于非活性状态3分钟。使用文本手稿中指定的底图和探针中的通用探头一步 RT-qPCR 套件使用定量逆转录RTPCR量化PPS。
将PPS归化为每毫升10至5个RNA拷贝的4倍。然后将TPCK-trypsin加入到含有H7N9下凝素的PPS中，最终浓度为每毫升10微克。在37摄氏度下孵育PPS一小时，形成功能亚单位HA1和HA2。
将规范化的PPS与DMEM介质以一比一的比例混合，然后将含有易感细胞的板带到生物安全柜。吸上一液，用100微升预热PBS洗涤细胞一次。在每个井中加入100微升的PPS-DMEM混合物，将每种PPS的感染性测试三分到一个易感细胞系。
在37摄氏度和5%的二氧化碳下孵育4至6小时。然后吸制上一液，并更换100微升DCM孵化板再孵化24至36小时，然后进行感染检测。我们的结果是PPS现在被认为是传染性的人。
因此，建议采取必要的安全防护程序，如戴口罩和在生物安全柜中进行感染性检测。该协议产生10种类型的伪型颗粒或PPS与两组血凝素和神经氨酸囊性口腔炎病毒G糖蛋白或无包糖蛋白。用透射电子显微镜对PPS进行成像，并在两个细胞系，A549和MDCK中评价了其感染率。
在H5的PPS组，H5N1、H5加N9和H5的感染率在细胞系A549和40%5%和5%的MDCK中分别约为90%18%和10%。在H7的PPS组，H7N9、H7加N1和H7的感染率在细胞系A549和8%4%和1%的MDCK中分别约为10%7%和1%。A549和MDCK细胞的感染性约为21%和16%。
而三角洲包络糖蛋白PP没有表现出感染性。请记住，PP 生产商 HEK-293T/17 细胞构成此程序的基础。因此，最佳生长教我们 HEK-293T/17 细胞是最重要的。
按照此过程或其他一些测试（如 L2）可接受边界测定。这种测定几乎可以消除受体偏好的生物特性，该模式将揭示PPS的tropism。自从他们从流感病毒中克隆出的糖蛋白被克隆成两个加最大值。
HA和NA蛋白可以单独研究，因此我们在它们之间重新分类。突变体和成熟效应可以探索。
